乙型肝炎病毒X蛋白转录抑制抑癌基因p53表达的研究

• 作 者: 李进 刘妍 戴久增 徐东平 张玲霞
• 机 构: 100039,北京,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室,100039,北京,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点
• 出 处: 中华实验和临床病毒学杂志
• 发表日期: 2006年20期
• 关键词: 乙型肝炎病毒 抑癌基因 p53 肝炎 病毒性 人 肝炎 乙型 蛋白p53 反式抑制 报告载体 酶联免疫吸附法 肝细胞癌

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用.方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3.1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性.进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBV X蛋白对p53基因表达的调节.结果成功构建报告载体pCAT3-p53p,克隆的p53启动子有顺式激活下游基因的活性;pCAT3-p53p与pcDNA3.1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降,说明HBV X蛋白抑制p53基因启动子的转录.RT-PCR结果表明,转染了pcDNA3.1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少.结论HBV X蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达,本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果,而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。