【摘 要】
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目的 探讨不同曲霉感染大蜡螟幼虫模型的构建及曲霉毒力的鉴定.方法 取烟曲霉ygy和黄曲霉LD-F菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),30℃培养5 d,分别收集曲霉孢子并配制1×108 CFU/L(低剂量)、1×109 CFU/L(中剂量)及1×1010 CFU/L(高剂量)孢子悬液;取大蜡螟幼虫60条随机均分为6组,分别注射上述2种曲霉孢子悬液高、中、低剂量各10μL,同时再取大蜡螟60条幼虫随机均分为6组,对应2种曲霉各设置3种形式对照,即空白对照(UTC)组(不做任何处理)、穿刺(PC)组[微
【机 构】
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贵州医科大学 分子生物学重点实验室, 贵州 贵阳 550004;贵州医科大学 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室, 贵州 贵阳 550004
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目的 探讨不同曲霉感染大蜡螟幼虫模型的构建及曲霉毒力的鉴定.方法 取烟曲霉ygy和黄曲霉LD-F菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),30℃培养5 d,分别收集曲霉孢子并配制1×108 CFU/L(低剂量)、1×109 CFU/L(中剂量)及1×1010 CFU/L(高剂量)孢子悬液;取大蜡螟幼虫60条随机均分为6组,分别注射上述2种曲霉孢子悬液高、中、低剂量各10μL,同时再取大蜡螟60条幼虫随机均分为6组,对应2种曲霉各设置3种形式对照,即空白对照(UTC)组(不做任何处理)、穿刺(PC)组[微量注射器穿刺但不注射磷酸盐缓冲液(PBS)]及PBS组(注射接种PBS 10μL),各组大蜡螟幼虫于37℃黑暗环境培养5 d,每日监测各组大蜡螟幼虫的体表颜色、应对刺激反馈及存活情况,采用生存曲线评价2种曲霉的毒力强弱;取2种曲霉孢子悬液高剂量组大蜡螟幼虫感染48 h后死亡幼虫和同时点的UTC组大蜡螟幼虫,采用苏木精和曙红(HE)染色检测幼虫虫体组织的病理学特征,采用六铵银染色检测幼虫体腔内菌丝形成情况,二者结合判断幼虫感染曲霉是否成功.结果 烟曲霉和黄曲霉感染幼虫后,幼虫黑化,其黑化程度与感染孢子悬液质量浓度无相关性,但其毒力有质量浓度依赖性(P<0.0001);组织病理检查可见幼虫体腔结构破坏,真菌菌丝在幼虫体内定植,表明曲霉感染模型构建成功.结论 成功构建曲霉感染的大蜡螟幼虫模型,烟曲霉毒力高于黄曲霉,相同曲霉菌株毒力有质量浓度依赖性.
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