重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究

• 作 者: 许芳 冯建成 李洁 石衍君 杨艳燕
• 机 构: 湖北大学生命科学学院
• 出 处: 湖北大学学报：自然科学版
• 发表日期: 2004年1期
• 关键词: 重组纳豆激酶 分离纯化 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌 口服溶栓剂 丝氨酸蛋白酶 nattokinase Escherichia coli purification e
• 基金项目: 湖北省科技厅自然科学基金(2003ABA116)资助课题

将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌，经IPTG诱导，表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶．首先对表达条件进行优化，最佳诱导温度是15℃，最佳诱导时间是10h．然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化，得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶．冷冻干燥品在SDS—PAGE上呈一条蛋白质带．纯化倍数35倍，纯酶比活1147．54．该酶的最适反应条件是45℃，pH8．0．酶活性在pH6．0～11．0，55℃以下稳定．