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RNA沉默在植物对抗外源性病源入侵,尤其是病毒入侵的过程中具有重要作用,当外源RNA或者病毒进入植物细胞时,RNA沉默被激活,从而把把外源性病源RNA和病毒等对细胞的影响降低到最低程度。类病毒这种非编码RNA由于其特殊的结构,为研究RNA沉默和非编码RNA在植物中的互作提供了绝佳的模型。在本文中,以本氏烟草、马铃薯纺锤块茎类病毒、转RDR6基因本氏烟草为实验材料,探究RNA沉默机制与马铃薯纺锤块茎类病毒之间是否互作,及具体互作的机制,并探究RDR6基因是否影响马铃薯纺锤块茎类病毒siRNA产生。
以马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)和本氏烟草作为基础研究材料,通过制备感受态细胞、质粒转化、质粒纯化、限制性内切酶酶切、体外转录、接种到野生型本氏烟草和转RDR6基因本氏烟草、收取病枝叶,从收取的病枝叶提取小RNA进行测序、生物信息学分析的实验方法。在此基础上探究PSTVd小RNA如何在宿主中发挥作用、如何巧妙的规避宿主RNA沉默机制对它们的影响,宿主RNA沉默对PSTVd的拮抗作用等。
在我们的实验中产生了PSTVdsiRNA,尤其是产生了大量的21ntsiRNA、22ntsiRNA、24ntsiRNA,此外还检测到一些不同片段的PSTVdsiRNA。这意味着PSTVd本身不具有沉默抑制子的功能,PSTVd在侵染实验植株后,实验植株产生的siRNA作为RNA沉默拮抗PSTVd的特征性小RNA分子,说明RNA沉默对PSTVd的具有拮抗作用,并且证明RDR6基因能促进PSTVdsiRNA的产生。
以马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)和本氏烟草作为基础研究材料,通过制备感受态细胞、质粒转化、质粒纯化、限制性内切酶酶切、体外转录、接种到野生型本氏烟草和转RDR6基因本氏烟草、收取病枝叶,从收取的病枝叶提取小RNA进行测序、生物信息学分析的实验方法。在此基础上探究PSTVd小RNA如何在宿主中发挥作用、如何巧妙的规避宿主RNA沉默机制对它们的影响,宿主RNA沉默对PSTVd的拮抗作用等。
在我们的实验中产生了PSTVdsiRNA,尤其是产生了大量的21ntsiRNA、22ntsiRNA、24ntsiRNA,此外还检测到一些不同片段的PSTVdsiRNA。这意味着PSTVd本身不具有沉默抑制子的功能,PSTVd在侵染实验植株后,实验植株产生的siRNA作为RNA沉默拮抗PSTVd的特征性小RNA分子,说明RNA沉默对PSTVd的具有拮抗作用,并且证明RDR6基因能促进PSTVdsiRNA的产生。