广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达

• 作 者: 宋慧 张学荣 周元聪 江涛 舒雨雁
• 机 构: 广西医科大学化学教研室,广西,南宁,530021;广西医科大学蛇毒研究所,广西,南宁,530021广西医科大学蛇毒研究所,广西,南宁,530021中国科学院上海生化与细胞研究所,上海,200031中国
• 出 处: 第三届中日双边药理学和临床药理学学术会议
• 发表日期: 2007年8期
• 关键词: 眼镜蛇 蛇毒神经 神经生长因子 蛋白表达

目的：采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性.
方法：将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白.超声破菌后,将上清液经Ni2+-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性.
结果：经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性.加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)％,重组品为(21±3)％,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF.
结论：在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白.