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为了制作CgA基因反义RNA转基因小鼠,构建了质粒pCAS2C,并把pCAS2C中完整的反义表达框显微注射入小鼠受精卵的雌原核中,随后将注射过DNA的受精卵移植入假孕鼠的输卵管中.假母所产子一代都用p1和p4引物对鼠尾基因组DNA进行PCR检测,选出2只首建鼠(PCR阳性).首建鼠与正常鼠杂交后得到F1代小鼠,经PCR方法筛选出来的阳性F1代鼠雌雄自交产生F2代.为了检测F2代鼠的基因型,将PCR方法鉴定为阳性的F2代小鼠分别与正常小鼠回交.只有回交后所得后代PCR检测结果全为阳性的F2代个体才是转基因纯