rTpNl7和rTpN47及其融合蛋白酶联免疫吸附试验检测梅毒血清标本的效果

• 作 者: 孙爱华 孙百莉 严杰
• 机 构: 浙江医学高等专科学校,杭州310053,断江省金华职业技术学院医学院,浙江大学医学院病原生物学系
• 出 处: 中华流行病学杂志
• 发表日期: 2007年28期

目的 构建梅毒螺旋体tpnl7、tpn47基因及tpnl7-tpn47融合基因原核表达系统，建立基于rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47的ELISAs并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法采用常规分子生物学方法扩增并克隆梅毒螺旋体tpnl7和tpn47基因，以连接引物PCR构建tpnl7-tpn47人工融合基因，建立上述目的基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的重组蛋白，Western blot检测其免疫性。分别以rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47为包被抗原，建立相应ELISAs检测健康人群、类风湿关节炎（RA）和系统性红斑狼疮（SLE）患者及梅毒患者血清标本中梅毒抗体并与现行TRUST和TPHA进行比较。结果克隆的tpnl7、tpn47基因及构建的tpnl7-tpn47融合基因与GenBank中相关序列相似性为100％。rTpNl7、rTpN47和rTpNl7-TpN47表达量分别为细菌总蛋白的37．2％、23．3％和29．8％，其提纯物电泳后均显示单一条带，并均能与梅毒抗体阳性血清发生明显的结合反应。rTpNl7-ELISA、rTpN47．ELISA和rTpNl7-TpN47-ELISA对所有健康人血清、RA和SLE患者血清标本的检测结果均为阴性，对梅毒患者血清标本检测阳性率分别为84．4％、82．3％和98．1％，其中rTpNl7-ELISA和rTpN47-ELISA检测阳性率低于TPHA（P〈0．01），rTpNl7-TpN47-ELISA检测阳性率相似（P〉0．05），但均高于TRUST（71．4％）。结论研究中建立的rTpNl7-ELISA、rTpN47-ELISA，尤其是rTpNl7-TpN47-ELISA，有望成为快速、简便、安全的梅毒患者血清学筛查方法。