论文部分内容阅读
[摘要]目的：研究Rac1蛋白和Ki-67在人翼状胬肉中的表达，分析二者在翼状胬肉表达的相关性，探讨利用Rac1作为标记物评估翼状胬肉生物学特性，为临床诊疗提供参考。方法：应用辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组织化学方法(S-P法)对39例原发性翼状胬肉及12例正常球结膜组织中的Rac1及Ki-67蛋白进行检测。结果：Rac1及Ki-67蛋白在翼状胬肉组织中的表达均高于正常结膜组，差异有显著性意义（Z=-3.386，Z=2.707，P均＜0.05）。Rac1及Ki-67蛋白表达之间的相关系数r=0.384，差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：Rac1及Ki-67在翼状胬肉中的高度表达，提示翼状胬肉在细胞骨架，基底膜分解代谢和细胞增殖活跃方面发生了变化。
[关键词]Rac1；Ki-67；翼状胬肉；免疫组织化学
[中图分类号]R730[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）10-1566-03
Rac1 and Ki-67 factor expression in human pterygium
GU Qiu-yan
(Teaching and Research Section of Ophthalmology,Xingtai Medical College,Xingtai 054000,Hebei,China)
Abstract:ObjectiveTo study the expression of Rac-1 and Ki-67 in primary pterygium by immunohistochemical method. The relationship among them was analyzed. The possibility was discussed utilizing of Rac1 and Ki-67 as a marker for assessment of biological characteristics ofpterygium and we tried to provide reference for clinical practice. MethodsImmunohistochemistry was used to measure the expression of Rac1 and Ki-67 in 39 cases of primary pterygium and 12 cases of normal conjunctiva.ResultsThe expression of Rac-1 and Ki-67 in primary pterygium were higher than normal conjunctiva with the difference being significant (Z=-3.386,Z=2.707，both P<0.05). Expression of Rac1 and Ki-67 expression was negatively correlated (r=0.384,P＞0.05).ConclusionRac1 and Ki-67 expression in the height of pterygium, suggesting that pterygium in the cytoskeleton, basement membrane breakdown and cell proliferation activity in metabolic changes.
Key words: Rac1; Ki-67; pterygium;immunohistochemistry
翼状胬肉是常见的眼表疾病之一，表现为呈三角形增厚的球结膜组织病变。其头部侵袭生长入角膜，体部位于睑裂区的一侧，造成患者美容缺陷。胬肉侵入角膜后还可导致散光、角膜像差改变等视功能损害[1]。组织病理学改变主要表现为结膜组织高度纤维血管化及纤维组织侵入角膜Bowman层及基质浅层。生物学上表现为具有一些肿瘤样特性：轻度发育不良、局部浸润性和高复发率等。
Ras 相关的C3肉毒素底物1(Rac1)通过调节肌动蛋白细胞骨架，促进细胞运动。当Rac1被激活后，可参与肌动蛋白应力纤维和粘附斑形成，促进细胞骨架结构重组，影响细胞的形体极化，增强细胞运动迁移。Rac1在多种肿瘤组织中的表达明显升高，且其与侵袭、转移密切相关。Ki-67是一种存在于增殖细胞核基质内的抗原，其增殖指数可以敏感地反映出细胞的增殖活性。翼状胬肉组织存在异常增殖调控，使胬肉上皮及间质细胞和正常结膜处于不同细胞分裂周期。
本研究采用免疫组化法检测39例翼状胬肉，12例正常球结膜标本中Rac1和Ki-67的表达，并分析这二者在翼状胬肉中表达的情况及相关性，从分子水平进一步探讨其发病机制，为深入研究和积极治疗翼状胬肉提供理论依据。
1材料和方法
1.1 标本来源：原发性翼状胬肉组织标本共39例，均取自2009年3月～2009年7月在河北省眼病治疗中心行翼状胬肉切除术的患者。其中男性21例，女性18例；平均年龄60.5岁；静止期12例，进展期27例。病程6个月～30年不等；生长部位：鼻侧38例，颞侧1例；对照组取正常球结膜12例，取材部位为鼻侧睑裂部近角巩膜缘球结膜组织。其中男性7例，女性5例；平均年龄41.2岁。所有病例术前均排除其他角膜及结膜疾病，近3个月无眼部用药史及手术史。
1.2 实验试剂：兔抗人Rac1多克隆抗体购于美国Abcam公司（产品编号ab78139-100）；鼠抗人Ki-67单克隆抗体浓缩液（北京中杉金桥生物技术有限公司），产品编号ZM-0166；S-P免疫组化试剂盒、浓缩型显色剂二氨基联苯胺（DAB）试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 方法：免疫组织化学染色（S-P法）：标本经10%中性福尔马林固定24h后进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋。5μm连续切片后，经二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水；于湿盒内用3%H2O2溶液室温孵育20min去除内源性过氧化氢酶；枸橼酸盐缓冲液微波抗原热修复；正常山羊血清封闭；分别滴加由0.01M PBS稀释的Rac1及Ki-67的一抗，工作浓度分别为1:600及 1:50，切片放入湿盒中，4℃冰箱过夜；分别滴加生物素标记的二抗工作液及辣根酶标记链霉卵白素工作液， 37℃温箱孵育30min；DAB显色，显微镜下观察显色情况，自来水充分冲洗中止显色。苏木素复染，常规脱水透明封片。以0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）液替代一抗做阴性对照，将已知阳性切片作为阳性对照。
1.4 结果判定：Rac1蛋白的表达情况根据染色强度及染色阳性细胞的百分率来计分。阳性细胞数≤10%为0分；在10%～25%为1分；在26%～50%为2分；＞51%为3分；染色强度计分标准：无色计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；黄褐色计3分。分值计算：将两种计分结果相乘并分为以下等级：0分：为阴性(－)；1～2分：为弱阳性(+)；3～4分：为阳性(++)；5分～：为强阳性(+++)。Ki-67定位于细胞核，阳性反应为细胞核呈棕褐色、颗粒状。Ki-67蛋白评分标准：在400倍视野下计数500个细胞，阳性细胞＜5%为阴性（－），5%～25%为弱阳性（+），26%～50%为阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。＞25%即为Ki-67高表达。
1.5 统计学方法：所有数据采用SPSS15.0统计软件包进行秩和检验和Spearman等级相关分析。以a=0.05为检验水准，P＜0.05为差异有显著性。
2结果
2.1 Rac1蛋白的表达：正常球结膜组织中未见Rac1表达（图1），翼状胬肉组织中Rac1的阳性物质位于上皮层细胞的胞浆中，呈弥漫性或散在分布的棕黄色或棕褐色颗粒状（图2），差异有显著性意义(P＜0.05) （表1）。39例翼状胬肉标本中，静止期Rac1阳性表达率为58.3%(7/12)，进展期阳性表达率为59.2%(16/27)，静止期和进展期翼状胬肉的Rac1阳性表达率比较无显著性差异(P＞0.05)。不同性别和不同年龄组Rac1阳性表达亦无显著性差异(P＞0.05)（表1）。
2.2 Ki-67蛋白的表达：正常球结膜组织中仅有少量上皮层的基底细胞表达Ki-67，阳性率为25%（3/12）（图3）。翼状胬肉Ki-67的阳性表达主要分布在上皮组织，以上皮的基底细胞为明显，染色呈细胞核型，为棕黄色到棕褐色颗粒，基质层亦有少量表达（图4）。Ki-67在翼状胬肉中的阳性表达高于正常结膜组织，差异有显著性意义(P＜0.05)。39例翼状胬肉标本中，静止期Ki-67阳性表达率为33.3%) (4/12)，进展期阳性表达率为77.8%(21/27)，进展期Ki-67蛋白表达明显高于静止期，统计学处理有显著性差异(P＜0.05)。不同性别和不同年龄组Ki-67阳性表达亦无显著性差异(P＞0.05)（表1）。
2.3 翼状胬肉Rac1与Ki-67表达相关性分析：胬肉中Rac1和Ki-67的表达分别进行Spearman等级相关分析，二者表达不具相关性（r=0.384，P＞0.05）（表2）。
3讨论
Rac1基因位于人染色体7p22，其编码产物是小G蛋白Rho(Ras homologue)家族重要成员。Rho家族蛋白可以通过多种途径参与和调节细胞的生长、凋亡和细胞周期的变化。Rac1是其重要成员之一，作为重要的细胞骨架结构调节因子，与肿瘤的恶性转化、侵袭、转移都密切相关。Rac1蛋白具有Rac1-GDP(失活状态)和Rac1-GTP(激活状态)两种形式，其生物功能的发挥依赖于此两种活性形式间的转换，且具有调节细胞骨架重组，影响细胞形体极化，促进细胞运动与迁移，抑制细胞凋亡的作用[2]。这可能导致翼状胬肉形成异常增殖、构建新的血管网及细胞外基质的改变等，最终导致了新的血管纤维组织的形成[3]。近年研究表明，Rac1在结肠癌、肺癌、乳腺癌和卵巢癌等肿瘤组织表达明显升高，且与侵袭、转移密切相关[4] 。在大多数胃肠道肿瘤细胞系中亦有表达[5]。翼状胬肉过去认为由于过多紫外线照射所引起的一种退行性病变。但组织病理学可见侵入角膜的胬肉组织显示是结膜组织中转移的上皮细胞和成纤维细胞[6]。有免疫组化实验研究显示翼状胬肉属于一种良性增殖性病变[7]。临床上胬肉则表现为新生的组织不断生长、增厚并逐渐侵入角膜，且手术切除后复发率高，这些证据表明翼状胬肉不仅不是退行性病变，而是一种良性肿瘤样病变[8]。
本研究首次采用免疫组化方法证实，人翼状胬肉上皮组织Rac1呈阳性表达，39例中的阳性表达率为59%（23/39），正常球结膜组织未见Rac1阳性表达。结果表明翼状胬肉Rac1阳性表达明显高于正常结膜组织（P＜0.05)。本研究的结果支持翼状胬肉具有肿瘤特性这一学说。虽然翼状胬肉上皮并未观察到形态学的异型性，但本研究发现近60%翼状胬肉上皮组织呈Rac1阳性表达，而正常结膜组织阴性表达，说明翼状胬肉上皮的生物学特性已经发生变化，因此我们认为Rac1既可作为反映翼状胬肉生物学行为的一个新型标志物，有助于预测胬肉的浸润情况，也为翼状胬肉术后的高复发率提供了理论依据。
Ki-67抗原是1983年由Gerdes等发现在增殖细胞中表达的一种核抗原，也是目前较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67的表达出现于G1中期到晚期，S期和G2期逐渐增加，有丝分裂期达高峰，分裂后迅速降解或丢失抗原决定簇，到G0期则不表达，半衰期为1h或更短。几乎所有组织中都有Ki-67表达，它是一个反映细胞增殖率的可靠指标，其高表达是细胞增殖活跃的重要标记，多种肿瘤组织都有Ki-67高表达[9]，Ki-67对肿瘤的转移及预后判断也具有重要意义。
本研究结果显示，Ki-67在翼状胬肉近基底膜的上皮细胞层呈阳性表达。39例翼状胬肉组织中的阳性表达率为64.1%（25/39）明显高于正常球结膜组织，与他人研究结果一致[10]。说明翼状胬肉组织存在异常的增殖调控，胬肉的上皮及间质细胞和正常结膜处于不同的细胞分裂周期，导致组织过度增殖。进展期胬肉Ki-67阳性表达（77.8%）明显高于静止期胬肉（33.3%），经统计学分析具有显著性差异（P＜0.05)。说明进展期翼状胬肉细胞的增殖活跃，翼状胬肉组织中存在增殖调控异常。
综上所述，本研究首次发现Rac1在翼状胬肉上皮组织高表达。Rac1及Ki-67在翼状胬肉中的表达明显均高于正常球结膜，说明翼状胬肉在细胞骨架、ECM分解代谢和细胞增殖方面表现出肿瘤组织的生物学特性，提示Rac-1介导的活化机制在翼状胬肉的侵袭过程中可能起重要作用。
[参考文献]
[1]Pesudovs K,Figueiredo FC.Comcal first surface wavefornt aberrations before and after pterygium surgery[J].Refract Surg,2006,22:921-925.
[2]陈维荣,刘俐敏,蔡高阳,等.直肠癌Rho C基因表达与临床病理特点的关系[J].中国普通外科杂志，2004,13(9):691-693.
[3]AS Solomon. Pterygium[J].Br J Ophthalmol,2006,90(6):665-666.
[4]黄晓园,吴明富,庄亮.人卵巢癌组织中Rac1蛋白和基质金属蛋白酶的表达及临床意义[J].华中科技大学学报（医学版）,2004,33(3):330-334.
[5]潘阳林,毕峰,刘娜,等.Rac亚家族在胃肠道肿瘤细胞系中的表达及活性[J].中华肿瘤杂志,2003，25(5):441-444.
[6]Maini R, Collison DJ,Maidment JM,et al.Pterygial derived fibroblasts express functionally active histamine and epidermal growth factor receptors[J]. Exp Eye Res.2002;74:237-244.
[7]Sakoonwatanyoo P,Tan DT,Smith DR. Expression ofp63 in pterygium and normal conjunct iva[J]. Cornea,2004,23(1):67-70.
[8]Reisman D,M cF adden JW,Lu G. Loss of heterozygosity and p53 expression in pterygium[J]. Cancer Lett,2004,206(1):77-83.
[9]Liu M,LawsonG,Delos M,et a1．Predictive vale of the fraction of cancer cells immunolabeled for proliferating cell nuclear antigen or Ki67 in biopsies of head and neck carcinomas to identify lymph node metastasis；comparison with clinical and radiologic examinations[J]．Head Neck,2003,25(4):280-288.
[10]李海燕,刘克兰,袁志刚,等.翼状胬肉中Ki-67和VEGF的表达[J].中国实用眼科杂志,2006,24(9):946-948.
[收稿日期]2011-06-10[修回日期]2011-08-12
编辑/张惠娟
[关键词]Rac1；Ki-67；翼状胬肉；免疫组织化学
[中图分类号]R730[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）10-1566-03
Rac1 and Ki-67 factor expression in human pterygium
GU Qiu-yan
(Teaching and Research Section of Ophthalmology,Xingtai Medical College,Xingtai 054000,Hebei,China)
Abstract:ObjectiveTo study the expression of Rac-1 and Ki-67 in primary pterygium by immunohistochemical method. The relationship among them was analyzed. The possibility was discussed utilizing of Rac1 and Ki-67 as a marker for assessment of biological characteristics ofpterygium and we tried to provide reference for clinical practice. MethodsImmunohistochemistry was used to measure the expression of Rac1 and Ki-67 in 39 cases of primary pterygium and 12 cases of normal conjunctiva.ResultsThe expression of Rac-1 and Ki-67 in primary pterygium were higher than normal conjunctiva with the difference being significant (Z=-3.386,Z=2.707，both P<0.05). Expression of Rac1 and Ki-67 expression was negatively correlated (r=0.384,P＞0.05).ConclusionRac1 and Ki-67 expression in the height of pterygium, suggesting that pterygium in the cytoskeleton, basement membrane breakdown and cell proliferation activity in metabolic changes.
Key words: Rac1; Ki-67; pterygium;immunohistochemistry
翼状胬肉是常见的眼表疾病之一，表现为呈三角形增厚的球结膜组织病变。其头部侵袭生长入角膜，体部位于睑裂区的一侧，造成患者美容缺陷。胬肉侵入角膜后还可导致散光、角膜像差改变等视功能损害[1]。组织病理学改变主要表现为结膜组织高度纤维血管化及纤维组织侵入角膜Bowman层及基质浅层。生物学上表现为具有一些肿瘤样特性：轻度发育不良、局部浸润性和高复发率等。
Ras 相关的C3肉毒素底物1(Rac1)通过调节肌动蛋白细胞骨架，促进细胞运动。当Rac1被激活后，可参与肌动蛋白应力纤维和粘附斑形成，促进细胞骨架结构重组，影响细胞的形体极化，增强细胞运动迁移。Rac1在多种肿瘤组织中的表达明显升高，且其与侵袭、转移密切相关。Ki-67是一种存在于增殖细胞核基质内的抗原，其增殖指数可以敏感地反映出细胞的增殖活性。翼状胬肉组织存在异常增殖调控，使胬肉上皮及间质细胞和正常结膜处于不同细胞分裂周期。
本研究采用免疫组化法检测39例翼状胬肉，12例正常球结膜标本中Rac1和Ki-67的表达，并分析这二者在翼状胬肉中表达的情况及相关性，从分子水平进一步探讨其发病机制，为深入研究和积极治疗翼状胬肉提供理论依据。
1材料和方法
1.1 标本来源：原发性翼状胬肉组织标本共39例，均取自2009年3月～2009年7月在河北省眼病治疗中心行翼状胬肉切除术的患者。其中男性21例，女性18例；平均年龄60.5岁；静止期12例，进展期27例。病程6个月～30年不等；生长部位：鼻侧38例，颞侧1例；对照组取正常球结膜12例，取材部位为鼻侧睑裂部近角巩膜缘球结膜组织。其中男性7例，女性5例；平均年龄41.2岁。所有病例术前均排除其他角膜及结膜疾病，近3个月无眼部用药史及手术史。
1.2 实验试剂：兔抗人Rac1多克隆抗体购于美国Abcam公司（产品编号ab78139-100）；鼠抗人Ki-67单克隆抗体浓缩液（北京中杉金桥生物技术有限公司），产品编号ZM-0166；S-P免疫组化试剂盒、浓缩型显色剂二氨基联苯胺（DAB）试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 方法：免疫组织化学染色（S-P法）：标本经10%中性福尔马林固定24h后进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋。5μm连续切片后，经二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水；于湿盒内用3%H2O2溶液室温孵育20min去除内源性过氧化氢酶；枸橼酸盐缓冲液微波抗原热修复；正常山羊血清封闭；分别滴加由0.01M PBS稀释的Rac1及Ki-67的一抗，工作浓度分别为1:600及 1:50，切片放入湿盒中，4℃冰箱过夜；分别滴加生物素标记的二抗工作液及辣根酶标记链霉卵白素工作液， 37℃温箱孵育30min；DAB显色，显微镜下观察显色情况，自来水充分冲洗中止显色。苏木素复染，常规脱水透明封片。以0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）液替代一抗做阴性对照，将已知阳性切片作为阳性对照。
1.4 结果判定：Rac1蛋白的表达情况根据染色强度及染色阳性细胞的百分率来计分。阳性细胞数≤10%为0分；在10%～25%为1分；在26%～50%为2分；＞51%为3分；染色强度计分标准：无色计0分；淡黄色计1分；棕黄色计2分；黄褐色计3分。分值计算：将两种计分结果相乘并分为以下等级：0分：为阴性(－)；1～2分：为弱阳性(+)；3～4分：为阳性(++)；5分～：为强阳性(+++)。Ki-67定位于细胞核，阳性反应为细胞核呈棕褐色、颗粒状。Ki-67蛋白评分标准：在400倍视野下计数500个细胞，阳性细胞＜5%为阴性（－），5%～25%为弱阳性（+），26%～50%为阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。＞25%即为Ki-67高表达。
1.5 统计学方法：所有数据采用SPSS15.0统计软件包进行秩和检验和Spearman等级相关分析。以a=0.05为检验水准，P＜0.05为差异有显著性。
2结果
2.1 Rac1蛋白的表达：正常球结膜组织中未见Rac1表达（图1），翼状胬肉组织中Rac1的阳性物质位于上皮层细胞的胞浆中，呈弥漫性或散在分布的棕黄色或棕褐色颗粒状（图2），差异有显著性意义(P＜0.05) （表1）。39例翼状胬肉标本中，静止期Rac1阳性表达率为58.3%(7/12)，进展期阳性表达率为59.2%(16/27)，静止期和进展期翼状胬肉的Rac1阳性表达率比较无显著性差异(P＞0.05)。不同性别和不同年龄组Rac1阳性表达亦无显著性差异(P＞0.05)（表1）。
2.2 Ki-67蛋白的表达：正常球结膜组织中仅有少量上皮层的基底细胞表达Ki-67，阳性率为25%（3/12）（图3）。翼状胬肉Ki-67的阳性表达主要分布在上皮组织，以上皮的基底细胞为明显，染色呈细胞核型，为棕黄色到棕褐色颗粒，基质层亦有少量表达（图4）。Ki-67在翼状胬肉中的阳性表达高于正常结膜组织，差异有显著性意义(P＜0.05)。39例翼状胬肉标本中，静止期Ki-67阳性表达率为33.3%) (4/12)，进展期阳性表达率为77.8%(21/27)，进展期Ki-67蛋白表达明显高于静止期，统计学处理有显著性差异(P＜0.05)。不同性别和不同年龄组Ki-67阳性表达亦无显著性差异(P＞0.05)（表1）。
2.3 翼状胬肉Rac1与Ki-67表达相关性分析：胬肉中Rac1和Ki-67的表达分别进行Spearman等级相关分析，二者表达不具相关性（r=0.384，P＞0.05）（表2）。
3讨论
Rac1基因位于人染色体7p22，其编码产物是小G蛋白Rho(Ras homologue)家族重要成员。Rho家族蛋白可以通过多种途径参与和调节细胞的生长、凋亡和细胞周期的变化。Rac1是其重要成员之一，作为重要的细胞骨架结构调节因子，与肿瘤的恶性转化、侵袭、转移都密切相关。Rac1蛋白具有Rac1-GDP(失活状态)和Rac1-GTP(激活状态)两种形式，其生物功能的发挥依赖于此两种活性形式间的转换，且具有调节细胞骨架重组，影响细胞形体极化，促进细胞运动与迁移，抑制细胞凋亡的作用[2]。这可能导致翼状胬肉形成异常增殖、构建新的血管网及细胞外基质的改变等，最终导致了新的血管纤维组织的形成[3]。近年研究表明，Rac1在结肠癌、肺癌、乳腺癌和卵巢癌等肿瘤组织表达明显升高，且与侵袭、转移密切相关[4] 。在大多数胃肠道肿瘤细胞系中亦有表达[5]。翼状胬肉过去认为由于过多紫外线照射所引起的一种退行性病变。但组织病理学可见侵入角膜的胬肉组织显示是结膜组织中转移的上皮细胞和成纤维细胞[6]。有免疫组化实验研究显示翼状胬肉属于一种良性增殖性病变[7]。临床上胬肉则表现为新生的组织不断生长、增厚并逐渐侵入角膜，且手术切除后复发率高，这些证据表明翼状胬肉不仅不是退行性病变，而是一种良性肿瘤样病变[8]。
本研究首次采用免疫组化方法证实，人翼状胬肉上皮组织Rac1呈阳性表达，39例中的阳性表达率为59%（23/39），正常球结膜组织未见Rac1阳性表达。结果表明翼状胬肉Rac1阳性表达明显高于正常结膜组织（P＜0.05)。本研究的结果支持翼状胬肉具有肿瘤特性这一学说。虽然翼状胬肉上皮并未观察到形态学的异型性，但本研究发现近60%翼状胬肉上皮组织呈Rac1阳性表达，而正常结膜组织阴性表达，说明翼状胬肉上皮的生物学特性已经发生变化，因此我们认为Rac1既可作为反映翼状胬肉生物学行为的一个新型标志物，有助于预测胬肉的浸润情况，也为翼状胬肉术后的高复发率提供了理论依据。
Ki-67抗原是1983年由Gerdes等发现在增殖细胞中表达的一种核抗原，也是目前较为肯定的核增殖标志基因。Ki-67的表达出现于G1中期到晚期，S期和G2期逐渐增加，有丝分裂期达高峰，分裂后迅速降解或丢失抗原决定簇，到G0期则不表达，半衰期为1h或更短。几乎所有组织中都有Ki-67表达，它是一个反映细胞增殖率的可靠指标，其高表达是细胞增殖活跃的重要标记，多种肿瘤组织都有Ki-67高表达[9]，Ki-67对肿瘤的转移及预后判断也具有重要意义。
本研究结果显示，Ki-67在翼状胬肉近基底膜的上皮细胞层呈阳性表达。39例翼状胬肉组织中的阳性表达率为64.1%（25/39）明显高于正常球结膜组织，与他人研究结果一致[10]。说明翼状胬肉组织存在异常的增殖调控，胬肉的上皮及间质细胞和正常结膜处于不同的细胞分裂周期，导致组织过度增殖。进展期胬肉Ki-67阳性表达（77.8%）明显高于静止期胬肉（33.3%），经统计学分析具有显著性差异（P＜0.05)。说明进展期翼状胬肉细胞的增殖活跃，翼状胬肉组织中存在增殖调控异常。
综上所述，本研究首次发现Rac1在翼状胬肉上皮组织高表达。Rac1及Ki-67在翼状胬肉中的表达明显均高于正常球结膜，说明翼状胬肉在细胞骨架、ECM分解代谢和细胞增殖方面表现出肿瘤组织的生物学特性，提示Rac-1介导的活化机制在翼状胬肉的侵袭过程中可能起重要作用。
[参考文献]
[1]Pesudovs K,Figueiredo FC.Comcal first surface wavefornt aberrations before and after pterygium surgery[J].Refract Surg,2006,22:921-925.
[2]陈维荣,刘俐敏,蔡高阳,等.直肠癌Rho C基因表达与临床病理特点的关系[J].中国普通外科杂志，2004,13(9):691-693.
[3]AS Solomon. Pterygium[J].Br J Ophthalmol,2006,90(6):665-666.
[4]黄晓园,吴明富,庄亮.人卵巢癌组织中Rac1蛋白和基质金属蛋白酶的表达及临床意义[J].华中科技大学学报（医学版）,2004,33(3):330-334.
[5]潘阳林,毕峰,刘娜,等.Rac亚家族在胃肠道肿瘤细胞系中的表达及活性[J].中华肿瘤杂志,2003，25(5):441-444.
[6]Maini R, Collison DJ,Maidment JM,et al.Pterygial derived fibroblasts express functionally active histamine and epidermal growth factor receptors[J]. Exp Eye Res.2002;74:237-244.
[7]Sakoonwatanyoo P,Tan DT,Smith DR. Expression ofp63 in pterygium and normal conjunct iva[J]. Cornea,2004,23(1):67-70.
[8]Reisman D,M cF adden JW,Lu G. Loss of heterozygosity and p53 expression in pterygium[J]. Cancer Lett,2004,206(1):77-83.
[9]Liu M,LawsonG,Delos M,et a1．Predictive vale of the fraction of cancer cells immunolabeled for proliferating cell nuclear antigen or Ki67 in biopsies of head and neck carcinomas to identify lymph node metastasis；comparison with clinical and radiologic examinations[J]．Head Neck,2003,25(4):280-288.
[10]李海燕,刘克兰,袁志刚,等.翼状胬肉中Ki-67和VEGF的表达[J].中国实用眼科杂志,2006,24(9):946-948.
[收稿日期]2011-06-10[修回日期]2011-08-12
编辑/张惠娟