【摘 要】
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目的 探讨乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2细胞)炎症反应的抑制作用,并探讨可能作用机制.方法 CCK-8法检测0～200 mg·L-1 MFG-E8对细胞活力影响.建立LPS诱导BV-2细胞视网膜变性疾病体外模型,分为对照组、LPS组、LPS+MFG-E8组、LPS+LY294002组和LPS+PDTC组.倒置显微镜观察BV-2细胞的形态改变,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,West-ern blot检测TNF-α和白细胞介素-6(I
【机 构】
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450052 河南省郑州市,郑州大学第一附属医院眼科;450000 河南省郑州市,郑州大学基础医学院药学部
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目的 探讨乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2细胞)炎症反应的抑制作用,并探讨可能作用机制.方法 CCK-8法检测0～200 mg·L-1 MFG-E8对细胞活力影响.建立LPS诱导BV-2细胞视网膜变性疾病体外模型,分为对照组、LPS组、LPS+MFG-E8组、LPS+LY294002组和LPS+PDTC组.倒置显微镜观察BV-2细胞的形态改变,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,West-ern blot检测TNF-α和白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达变化,及PI3K-Akt和NF-κB相关通路蛋白表达变化.结果 0 mg·L-1、10 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1和200 mg·L-1的MFG-E8对BV-2细胞的活性无明显影响,细胞活力差异无统计学意义(P>0.05);MFG-E8对LPS诱导的BV-2细胞形态变化具有一定的逆转作用;ELISA检测结果显示,LPS组BV-2细胞中TNF-α的含量较对照组明显升高(P<0.001),LPS+MFG-E8组BV-2细胞中TNF-α的含量较LPS组显著下降(P<0.001).Western blot检测结果显示,LPS组BV-2细胞中TNF-α和IL-6蛋白相对表达量均显著高于对照组(均为P<0.05),LPS+MFG-E8组BV-2细胞中TNF-α和IL-6蛋白相对表达量均较LPS组明显降低(均为P<0.05).LPS组BV-2细胞中NF-κB p-p65蛋白相对表达量明显高于对照组,p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(均为P<0.001);LPS+MFG-E8组BV-2细胞中NF-κB p-p65蛋白相对表达量较LPS组明显降低,p-PI3 K、p-Akt蛋白相对表达量均较LPS组明显升高(均为P<0.001).结论 MFG-E8可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活,从而减轻LPS诱导的小胶质细胞炎症反应.
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