以AdMax载体系统构建和制备肾癌相关抗原G250基因重组腺病毒表达载体

• 作 者: 齐桓
• 机 构: 南方医科大学南方医院泌尿外科
• 出 处: 南方医科大学学报
• 发表日期: 2008年9期
• 关键词: 腺病毒载体 肿瘤相关抗原 树突状细胞 advenovirus vector tumor-associated antigen dendritic cells

目的构建肾癌相关抗原G250重组腺病毒载体，以期用于基因转染树突状细胞（DC）治疗肾癌的实验研究。方法利用AdMax包装系统，首先构建穿梭质粒pDC316-G250，然后将所得的穿梭质粒和辅助质粒pBHGlox（delta）E1，3Cre以CaCL2法质粒共转染293细胞得到重组腺病毒Ad／G250，CsCI梯度离心纯化病毒，TCID50法测定病毒滴度。Ad／G250转染DC细胞，RT—PCR及流式细胞仪检测G250的表达。结果采用双质粒共转染293细胞，Cre／loxP位点同源重组方法构建了El和E3缺