雷帕霉素对甲氨蝶呤诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞凋亡的影响

• 作 者: 张朝霞 张轶庠 刘智屏 陈俐丽 肖智辉 李博 唐希才
• 机 构: 518020 深圳，暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院儿科,518020 深圳，暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院儿科,518020 深圳，暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院儿科,518020
• 出 处: 中华实用儿科临床杂志
• 发表日期: 2017年32期
• 关键词: 急性淋巴细胞白血病 雷帕霉素 甲氨蝶呤

目的

探讨雷帕霉素(RAPA)对甲氨蝶呤(MTX)诱导急性淋巴细胞白血病(ALL)EU-4细胞凋亡的影响。

方法

分别使用5 μg/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L和100 μg/L的RAPA预处理EU-4细胞0.5 h，RAPA未处理组作为对照组，收集细胞，Western blot检测LC-3蛋白，流式细胞技术检测凋亡率。观察不同质量浓度的RAPA预处理对EU-4细胞自噬和凋亡的影响，确定RAPA预处理浓度。将EU-4细胞分为RAPA预处理组和未处理组，分别使用0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L的MTX作用24 h，流式细胞技术检测凋亡率，Western blot检测LC-3蛋白，酶标仪测定吸光度(A₅₆₂)，根据标准曲线计算样品的蛋白浓度。

结果

检测对照组和不同浓度RAPA预处理组的EU-4细胞凋亡率显示，对照组，5 μg/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L和100 μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率分别为(7.51±0.32)%、(7.33±0.41)%、(7.71±0.51)%、(7.63±0.38)%、(7.80±0.43)%和(16.66±0.87)%，5 μg/L、10 μg/L、25 μg/L和50 μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(t＝0.427、－0.417、－0.297、－3.561，均P>0.05)，而100 μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率显著高于对照组，差异有统计学意义(t＝－28.815，P<0.01)。根据Western blot和流式细胞技术的检测结果综合考虑，选取50 μg/L作为RAPA预处理的浓度。流式细胞技术检测RAPA预处理组和未处理组MTX作用24 h后EU-4细胞的凋亡率显示，RAPA预处理组用0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L MTX作用24 h后，EU-4细胞的凋亡率分别为(50.23±2.11)%、(66.88±2.89)%和(73.11±2.67)%，未处理组0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L MTX作用24 h后，EU-4细胞的凋亡率分别为(22.53±1.67)%、(42.82±2.26)%和(53.22±1.93)%。相同浓度的MTX作用24 h后，RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率均显著高于未处理组，差异均有统计学意义(t＝12.693、66.148、14.429，均P<0.01)。

结论

RAPA预处理后，较低剂量的MTX即可诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞大量凋亡。