【摘 要】
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[目的]本试验旨在揭示胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的抑制作用.[方法]奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)于含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,将细胞分为对照组、胆碱组(100μmol·L-1)、热应激组(42℃,2 h)、热应激+胆碱组.采用CCK-8法分析添加胆碱对MAC-T细胞的药物毒性及细胞增殖活性的影响,采用Western blot分析蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)磷酸化水平及激活转录因子4(ATF-4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)
【机 构】
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南京农业大学动物科技学院,江苏 南京210095
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[目的]本试验旨在揭示胆碱对热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的抑制作用.[方法]奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)于含10％胎牛血清的DMEM培养基中进行体外培养,将细胞分为对照组、胆碱组(100μmol·L-1)、热应激组(42℃,2 h)、热应激+胆碱组.采用CCK-8法分析添加胆碱对MAC-T细胞的药物毒性及细胞增殖活性的影响,采用Western blot分析蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)磷酸化水平及激活转录因子4(ATF-4)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2关联X(Bax)蛋白表达水平,RT-qPCR检测GRP78、CHOP、ATF-4、Bax、Bcl-2、Caspase-3(胱氨酸蛋白3基因)mRNA水平.[结果]与对照组相比,热应激组MAC-T细胞的相对存活率极显著降低(P<0.01),p-PERK、ATF-4、CHOP、GRP78和Bax蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Bcl-2表达量极显著下降(P<0.01),且显著上调Caspase-3 mRNA表达水平;与热应激组相比,热应激+胆碱组MAC-T细胞相对存活率显著增加(P<0.05),p-PERK、ATF-4、CHOP、GRP78和Bax蛋白表达量均极显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量升高(P<0.05),且Caspase-3 mRNA表达水平受到明显抑制.[结论]胆碱通过调控内质网应激介导的凋亡信号通路的表达,抑制由热应激诱导的奶牛乳腺上皮细胞的凋亡.
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