毒胡萝卜素对转化生长因子β1刺激的小鼠肺成纤维细胞凋亡的影响

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目的 研究毒胡萝卜素对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的小鼠肺成纤维细胞周期、细胞凋亡及半胱氨酸特异性蛋白酶-12(Caspase-12)蛋白表达的影响.方法 液氮冻存的小鼠肺成纤维细胞株(L929),经复苏传代培养,同步化后分为3组:对照组、模型组和实验组,对照组的L929细胞只加入RPMI-1640培养基,模型组为L929 +5 ng·mL-1 TGF-β1,实验组为L929 +5ng·mL-TGF-β1诱导24 h+4μmol·L-1毒胡萝卜素干预24h.用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,以免疫组织细胞化学方法检测Caspase-12蛋白表达.结果 细胞周期:各组间的G1期、S期、G2期变化差异均有统计学意义(均P<0.05).对照组、模型组和实验组的G1期细胞比例分别为(58.72±8.35)%,(52.13±7.61)%,(73.02±9.32)%,这3组的S期比例分别为(29.50±4.24)%,(40.54±6.31)%,(21.66±4.17)%,这3组的G2期比例分别为(11.75±0.96)%,(7.62±3.22)%,(6.09±2.11)%,组间比较差异均有统计学意义(均P <0.05);但G2期实验组和模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组、模型组、实验组的凋亡率分别为6.73%,5.03%,21.53%,caspase-12蛋白表达分别为3356.45±205.74,2645.56±168.36,5424.76±241.79,这2项指标组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 毒胡萝卜素可促进肺成纤维细胞凋亡,增加caspase-12蛋白表达.“,”Objective To explore the effects of thapsigargin on the cell cycle,apoptosis and cysteinyl aspartate specific proteinase (Caspase-12) protein expression in mouse lung fibroblast stimulated transforming growth factor-β1 (TGF-β1).Methods Mice lung fibroblast lines frozen in liquid nitrogen were recovered and cultured.Experiment was divided into three groups:the control group,model group and experimental group.RPMI-1640 medium was only add in the control group,5 ng · mL-1 TGF-β1 was add in the model group;while in experimental group,5 ng · mL-1 TGF-β1 was add for 24 hours,then 4 pmol · L-1 thapsigargin was add.After 24 h,the cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry instrument.The protein expression of caspase-12 was examined using the immunohistochemical method.Results In control group,model group and experimental group,the proportion of G1 phase cells were (58.72 ±8.35)%,(52.13 ±7.61)% and (73.02 ±9.32)%,which of S phase cells were (29.50 ± 4.24) %,(40.54 ± 6.31) % and (21.66 ± 4.17) %,G2 phase cells was (11.75 ± 0.96) %,(7.62 ± 3.22)% and (6.09 ± 2.11)% respectively,the differences had statistical significance in G1 phase,S phase and G2 phase among groups (all P < 0.05),while there was no significant difference in G2 phase between experimental group and model group (P > 0.05).The apoptosis rate in control group,model group and experimenta group were 6.73%,5.03% and 21.53% respectively,the protein expression of Caspase-12 were 3356.45 ±205.74,2645.56 ± 168.36 and 5424.76 ± 241.79,the differences in above two indicators were statistical significant (all P < 0.05).Conclusion Thapsigargin could promote the apoptosis of lung fibroblast and increase the protein expression of caspase-12.
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