【摘 要】
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目的:探讨PPP2R5C对儿童急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞活性的影响及其相关机制.方法:通过靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA (siRNA)技术下调Molt-4细胞中PPP2R5C的表达,同时设置空白对照组、阴性对照组及17-DMAG组,其中阴性对照组转染siRNA-NC,17-DMAG组使用终浓度为6.4 μmol/L的热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-DMAG处理细胞48 h,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测转染效率;CCK-8法
【机 构】
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南阳医学高等专科学校第一附属医院儿二科,河南南阳473000;南阳医学高等专科学校第一附属医院血液内科,河南南阳473000
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目的:探讨PPP2R5C对儿童急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞活性的影响及其相关机制.方法:通过靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA (siRNA)技术下调Molt-4细胞中PPP2R5C的表达,同时设置空白对照组、阴性对照组及17-DMAG组,其中阴性对照组转染siRNA-NC,17-DMAG组使用终浓度为6.4 μmol/L的热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-DMAG处理细胞48 h,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和免疫印迹法(Western blot)检测转染效率;CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU检测各组细胞增殖水平,流式细胞术检测各组细胞周期分布比例,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中HSP90和糖皮质激素受体(GR)的表达变化.结果:Molt-4细胞转染siRNA-PPP2R5C后,细胞中PPP2R5C mRNA与蛋白表达均明显下调,与空白对照组和si-NC组相比有显著性差异(P＜0.05);相比空白对照组和si-NC组,siRNA-PPP2R5C组和17-DMAG组细胞的增殖活性明显降低(P＜0.05),EdU阳性细胞率明显减少(P＜0.05),G1期细胞比例减少而G2期细胞比例增加(P＜0.05),细胞凋亡率也明显增加(P＜0.05);此外,siRNA-PPP2R5C组细胞中,PPP2R5C mRNA与蛋白表达较空白对照组和si-NC组明显下调(P＜0.05),17-DMAG组细胞中PPP2R5C mRNA与蛋白表达较空白对照组和si-NC组也明显下调(P＜0.05).结论:下调PPP2R5C基因表达可抑制儿童急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞的活性,使细胞发生G2期阻滞,并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Hsp90-GR信号途径相关.
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