【摘 要】
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目的克隆人血管内皮抑素基因(endostatin),纯化其表达蛋白并初步检测纯化蛋白的生物学活性.方法用PCR技术从正常成人肝cDNA库扩增出人血管内皮抑素基因,将其克隆进pBluescrip
【机 构】
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上海第二医科大学瑞金医院核医学科,上海第二医科大学瑞金医院心血管内科,美国波士顿新英格兰医学中心放射和肿瘤生物学实验室
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目的克隆人血管内皮抑素基因(endostatin),纯化其表达蛋白并初步检测纯化蛋白的生物学活性.方法用PCR技术从正常成人肝cDNA库扩增出人血管内皮抑素基因,将其克隆进pBluescript中测定其核苷酸序列.构建大肠杆菌分泌性表达载体pET-22b(+)-endostatin-6xHis,IPTG诱导表达,经Ni2+-IDA Sepharose 6B亲和纯化该表达蛋白,并采用血管内皮细胞增殖抑制试验检测其活性.结果经PCR扩增成功获得551bp的人血管内皮抑素基因,测序正确,在大肠杆菌中表达后,该表
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