股骨头坏死骨组织对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

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目的

观察体外坏死股骨头骨组织对犬骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖分化的影响。

方法

用液氮冷冻法制作犬股骨头坏死模型,采用分离液分离法结合贴壁法获取犬BMSC,利用Transwell培养板将BMSC与不同骨组织共培养,依据培养条件不同分3组,空白组:10%胎牛血清+DMEM培养基,对照组:10%胎牛血清+DMEM培养基+正常股骨头骨组织,实验组:10%胎牛血清+DMEM培养基+坏死股骨头骨组织。观察细胞生长状况,采用噻唑蓝(MTT)比色法测各组细胞相对数,作细胞内碱性磷酸酶染色并检测培养液上清中碱性磷酸酶浓度,茜素红染色、油红O染色分别观察钙结节、脂滴的形成。

结果

对照组与实验组BMSC增殖率高于空白组,在1、3、5 d差异有统计学意义(P<0.05),实验组增殖率在5、7 d时大于对照组(P<0.05); 7 d时细胞内碱性磷酸酶染色示对照组与实验组均为阳性,第7、9天培养液上清中碱性磷酸酶浓度按以下顺序依次减小,对照组>实验组>空白组(20.4±1.2)U/L比(60.5±4.5)U/L,P<0.05。21 d时茜素红染色示各组均有钙结节形成,数量按以下顺序依次减小,对照组>实验组>空白组,21 d时油红O染色示各组均未见有脂滴形成。

结论

正常与坏死股骨头骨组织对BMSC增殖均有促进作用,并且均可诱导BMSC向成骨细胞分化而未向脂肪细胞分化,坏死股骨头骨组织对BMSC增殖的促进作用稍强;而对BMSC的成骨诱导能力弱于正常股骨头骨组织。

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