【摘 要】
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重组腺相关病毒(r AAV)是近年来发展的较为成熟的一种病毒基因载体,常用于过表达或者敲低等动物模型的建立与基因治疗等。本研究使用三质粒共转染的方法,在HEK293细胞中包装
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重组腺相关病毒(r AAV)是近年来发展的较为成熟的一种病毒基因载体,常用于过表达或者敲低等动物模型的建立与基因治疗等。本研究使用三质粒共转染的方法,在HEK293细胞中包装出含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的r AAV,通过一系列实验,确定纯化方法为脱氧胆酸钠裂解,高浓度Na Cl去除杂蛋白,最后通过肝素层析柱纯化,经超滤管浓缩后其滴度可达1013gene copys/m L以上。将纯化后的r AAV感染HEK293细胞,通过实验确定使用感染复数为106、感染3 d的细胞能够表达出高水平的EGFP。将r AAV注射入大鼠中脑黑质致密部,经过3周的感染发现,r AAV可以特异性地感染多巴胺能神经元,表达出EGFP。通过以上实验,建立了一个在实验室小量制备r AAV的方法,且此方法制备的r AAV完全满足体内与体外实验的要求。
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