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目的: 探讨Toll样受体 (Toll like receptors, TLR)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及其可能的分子机制。方法:应用real time PCR及流式细胞术检测TLR在人牙周膜干细胞 (human periodontal dental stem cells, hPDLSCs)上的表达。在成骨培养基中加入多种浓度的不同TLR配体培养7~14 d，检测TLR对hPDLSCs成骨的影响。通过Western blotting方法检测TLR配体刺激hPDLSCs 7 d后，丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen activated protein kinase, MAPK)及蛋白激酶B ( protein kinase B, PKB or AKT) 磷酸化水平的变化及runt相关转录因子2 (runt related transcription factor 2, Runx2)的变化，并对比加入MAPK及AKT抑制剂后Runx2的变化, 探究TLR是否通过影响下游的MAPK及AKT的活化而影响hPDLSCs的成骨分化。结果: TLR1、TLR3、TLR4、TLR6在hPDLSCs上表达较高, 不同TLR的阳性细胞百分比为TLR1 2.82%±0.68%，TLR2 1.26%±0.09%，TLR3 13.23%±2.05%，TLR4 3.64%±0.79%，TLR6 3.21%±1.64%，其趋势与TLR 在hPDLSCs中mRNA表达相一致。高浓度的TLR配体 ( PolyI:C 10 mg/L, LPS 10 mg/L , Pam3CSK4 1 mg/L, FSL-1 50 μg/L) 刺激hPDLSCs可减少矿化结节的形成, 降低ALP染色及ALP活性。高浓度TLR配体( PolyI:C 10 mg/L, LPS 10 mg/L , Pam3CSK4 1 mg/L, FSL-1 50μg/L)刺激还可下调ERK、P38、JNK及AKT的磷酸化水平, 伴随Runx2的表达水平下调, 应用MAPK及AKT抑制剂也可下调Runx2的表达。结论: 高浓度的TLR配体刺激可抑制hPDLSCs的成骨分化, 这种抑制作用和MAPK及AKT磷酸化降低相关。