【摘 要】
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本研究旨在观察绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSS、CTSB)的mRNA在体外成熟过程中的表达规律,探明卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSS、CTSB)mRNA的表达与卵母细胞体外发育能力之间的相
【机 构】
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河北农业大学动物科技学院,河北省牛、羊胚胎工程技术研究中心,河北省畜牧兽医研究所,廊坊市畜牧水产局
【基金项目】
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国家科技支撑计划(2011BAD191302);教育部科学技术研究重点项目(211018)
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本研究旨在观察绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSS、CTSB)的mRNA在体外成熟过程中的表达规律,探明卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSS、CTSB)mRNA的表达与卵母细胞体外发育能力之间的相关性。采用Rea-ltimePCR方法检测绵羊在体外成熟0、8、16和24h的卵丘细胞中组织蛋白酶(CTSB、CTSS)的mRNA表达水平,以及在成熟液中添加组织蛋白酶抑制剂(E-64)后卵丘细胞中CTSB和CTSS的mRNA表达量在体外成熟前及体外成熟后的表达水平,并测定在成熟液中添加1、5、10μmol.L-1 E-64对卵母细胞成熟率、受精率及囊胚发育率的影响。结果,卵丘细胞中的CTSS和CTSB mRNA表达均随着体外成熟时间的增加(IVM 0h、IVM 8h和IVM 16h)呈下降的趋势(P<0.01)。添加5和10μmol.L-1 E-64组的卵丘细胞中CTSS和CTSB mRNA表达水平较对照组和1μmol.L-1组均显著性降低(P<0.01),而5和10μmol.L-1组间的CTSS和CTSB mRNA表达水平无显著差异(P>0.05)。成熟液中添加5和10μmol.L-1的E-64组的囊胚发育率(26.82%和30.95%)显著高于1μmol.L-1组和对照组(18.23%和15.63%,P<0.05),但5和10μmol.L-1组对卵母细胞的成熟率及卵裂率与1μmol.L-1组和对照组间无显著性差异(P>0.05)。结果表明,绵羊卵丘细胞中CTSS和CTSB的mRNA表达水平在体外成熟过程中呈下降趋势,其mRNA表达水平与胚胎的发育能力呈负相关;组织蛋白酶特异性抑制剂E-64可下调绵羊卵丘细胞中CTSS和CTSB的mRNA表达水平,并提高卵母细胞随后的体外发育能力。
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