论文部分内容阅读
[摘要] 目的 探討非小细胞肺癌（non-small lung cancer， NSCLC）患者血清miR （microRNA）系列基因表达水平及与化疗疗效的相关性。 方法 2011年3月～2016年9月选择200例未经任何抗癌治疗的NSCLC患者作为NSCLC组，100例健康志愿者作为健康组，分别收集血清样本；25例晚期NSCLC患者化疗前和化疗后的血清样本。采用qRT-PCR方法检测NSCLC组和健康组中血清miR系列基因表达水平，判断血清miR系列基因表达水平与预后的关系。 结果 NSCLC组的血清miR-19a、miR-19b-1、miR-20a、miR-17-3p、miR-18a和miR-92-1基因表达与健康组存在差异（P<0.01）。NSCLC患者的血清上述基因表达化疗前与化疗后存在明显差异（P<0.05）；健康组的血清miR-19a、miR-19b-1、miR-20a、miR-17-3p、miR-18a和miR-92-1基因表达与化疗前患者存在明显差异（P<0.05），与化疗后的患者比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 NSCLC患者血清存在高水平miR系列基因表达，化疗可降低miR系列基因表达水平，上述6种miR基因血清表达有助于NSCLC的诊断、预测和预后的判断，联合检测有助于敏感性的提高。
[关键词] 非小细胞肺癌；miR系列基因；预测；预后
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）15-0018-04
Study on the correlation between the expression level of serum miR gene and chemotherapy efficacy in NSCLC patients
CHEN Qun SHI Qin
Department of Oncology， Fuzhou Pulmonary Hospital of Fujian， Clinical Teaching Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350008， China
[Abstract] Objective To investigate the correlation between the expression levels of serum miR（microRNA） gene and chemotherapy efficacy in the patients with non-small cell lung cancer（NSCLC）. Methods From March 2011 to September 2016， 200 NSCLC patients without any anticancer treatment were selected as the NSCLC group. 100 healthy volunteers were selected as the healthy group. Serum samples were collected separately； serum samples before and after chemotherapy in 25 patients with advanced NSCLC were collected. The qRT-PCR method was used to detect the expression level of serum miR gene in NSCLC group and healthy group， and the relationship between the expression level of serum miR gene and prognosis was determined. Results The serum levels of miR-19a， miR-19b-1， miR-20a， miR-17-3p， miR-18a， and miR-92-1 in the NSCLC group were different from those in the healthy group（P<0.01）. There were significant differences in the expressions of the above genes before and after chemotherapy in the serum of NSCLC patients（P<0.05）； the serum levels of miR-19a， miR-19b-1， miR-20a， miR-17-3p， miR-18a and miR-92-1 in the healthy group were significantly different from those before chemotherapy（P<0.05）. There was no statistical difference compared with the patients after chemotherapy（P>0.05）. Conclusion There is a high level of miR gene expression in the serum of NSCLC patients. Chemotherapy reduces miR gene expression levels. The above six miR gene serum expressions contribute to the diagnosis， prediction and prognosis of NSCLC. The joint detection helps increase sensitivity. [Key words] Non-small cell lung cancer （NSCLC）； miR gene； Prediction； Prognosis
中国恶性肿瘤中发病率和病死率最高的是肺癌，而且非小细胞肺癌（NSCLC）占85%，常见临床分期是ⅢB或Ⅳ期。化疗依然是晚期NSCLC不可替代的手段，其治疗目标是延长患者总生存期（OS）、提高生活质量（QOL）、降低疾病相关的并发症。虽然，针对肺癌的化学预防和治疗已经取得了一些进展，但肺癌治疗效果依旧不佳，近年来的研究表明肺癌的发生与转移是一个极其复杂的多基因调控的多阶段、多步骤过程。因此，从基因表达调控方面研究肺癌发生发展的机制，了解肺癌治疗预测的相关因素，能更精准预测化疗疗效，优化治疗方案，提高肺癌患者的生活质量和远期生存率已经十分必要。microRNA（miRNA）是一类具有在转录后水平调控基因表达功能的非编码小分子miRNA，在细胞的生长、增殖、代谢、凋亡等方面都有着重要的作用。通过监测NSCLC患者血清miR系列基因化疗前后的变化，从而确定化疗效果。本研究涉及6个指标miR-19a、miR-19b-1、miR-20a、miR-17-3p、miR-18a和miR-92-1的血清检测，主要是观察比较NSCLC患者化疗前后血清miRNA的表达水平的改变，分析该改变对化疗疗效的影响，为血清miRNA在NSCLC治疗中的相关研究提供参考，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 病例收集 分别收集2011年3月～2016年9月间的225例经病理组织学或细胞检查证实的NSCLC患者，其中，200例采集抗癌治疗前的血清样本，作为NSCLC组，男133例，女67例，中位年龄65岁；另外，25例为晚期NSCLC患者，给予至少2个周期以上的常规一线化疗，分别采集化疗前和化疗2个疗程后的血清样本，作为治疗组，男16例，女9例，中位年龄63岁。选取100例正常体检且各项指标正常的健康体检者的血清样本，作为健康组，男63例，女37例，中位年龄59岁。三组对象在性别、年龄方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。按期整理临床治疗资料。
1.1.2 入选标准[1，2] 患者年龄18～75岁，男女不限；化疗患者具有化疗的指征，ECOG评分0～1分；生存时间≥3个月；具有可测量的病灶，胸片、普通CT或MRI扫描病灶≥20 mm，螺旋CT或PET-CT扫描病灶≥10 mm；机体上没有未愈合的创伤；体检符合要求，外周血象：WBC≥4.0×109/L，PLT≥80×109/L，Hb≥90 g/L。肾功能：Cr≤2.0×UNL（正常上限）。肝功能：BIL≤2.0×UNL，ALT/AST≤5.0×UNL。心电图基本正常；依从性好，配合血清样本采集。
1.1.3 排除标准[1，2] 不符合入选标准者；具有严重的心肺功能衰竭；腹泻（水样便）或麻痹性肠梗阻；无法进行疗效评价者；未得到控制的糖尿病；急性感染；孕妇和哺乳期妇女；健康组曾患有恶性肿瘤，NSCLC患者合并第二原发恶性肿瘤。
1.1.4 剔除标准[1，2] 未按上述标准入组并完成有关检查治疗者；因故和无故明显推迟给药时间超过2周者。观察期间合并使用其他抗肿瘤化疗药物者；化疗患者观察期间对靶病灶同时进行放疗者，或兼做其他抗肿瘤方案者。
1.2 方法
1.2.1 RNA分离提取 按照试剂说明书，血清的total RNA 使用microRNAs Isolation Kit（Applied Biosystems，Forster City，CA，USA）抽提。total RNA溶于DEPC處理水中，-80℃保存。RNA浓度使用Nanodrop 2100（Nanodrop，Wilmington，DE）测量。
1.2.2 实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）分析 差异表达使用两步方法的实时定量逆转录聚合酶链反应分析。第一步cDNA的反转录，第二步是实时定量逆转录聚合酶链反应。miRNA的反转录相关操作按照试剂盒One Step PrimeScript
[关键词] 非小细胞肺癌；miR系列基因；预测；预后
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）15-0018-04
Study on the correlation between the expression level of serum miR gene and chemotherapy efficacy in NSCLC patients
CHEN Qun SHI Qin
Department of Oncology， Fuzhou Pulmonary Hospital of Fujian， Clinical Teaching Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350008， China
[Abstract] Objective To investigate the correlation between the expression levels of serum miR（microRNA） gene and chemotherapy efficacy in the patients with non-small cell lung cancer（NSCLC）. Methods From March 2011 to September 2016， 200 NSCLC patients without any anticancer treatment were selected as the NSCLC group. 100 healthy volunteers were selected as the healthy group. Serum samples were collected separately； serum samples before and after chemotherapy in 25 patients with advanced NSCLC were collected. The qRT-PCR method was used to detect the expression level of serum miR gene in NSCLC group and healthy group， and the relationship between the expression level of serum miR gene and prognosis was determined. Results The serum levels of miR-19a， miR-19b-1， miR-20a， miR-17-3p， miR-18a， and miR-92-1 in the NSCLC group were different from those in the healthy group（P<0.01）. There were significant differences in the expressions of the above genes before and after chemotherapy in the serum of NSCLC patients（P<0.05）； the serum levels of miR-19a， miR-19b-1， miR-20a， miR-17-3p， miR-18a and miR-92-1 in the healthy group were significantly different from those before chemotherapy（P<0.05）. There was no statistical difference compared with the patients after chemotherapy（P>0.05）. Conclusion There is a high level of miR gene expression in the serum of NSCLC patients. Chemotherapy reduces miR gene expression levels. The above six miR gene serum expressions contribute to the diagnosis， prediction and prognosis of NSCLC. The joint detection helps increase sensitivity. [Key words] Non-small cell lung cancer （NSCLC）； miR gene； Prediction； Prognosis
中国恶性肿瘤中发病率和病死率最高的是肺癌，而且非小细胞肺癌（NSCLC）占85%，常见临床分期是ⅢB或Ⅳ期。化疗依然是晚期NSCLC不可替代的手段，其治疗目标是延长患者总生存期（OS）、提高生活质量（QOL）、降低疾病相关的并发症。虽然，针对肺癌的化学预防和治疗已经取得了一些进展，但肺癌治疗效果依旧不佳，近年来的研究表明肺癌的发生与转移是一个极其复杂的多基因调控的多阶段、多步骤过程。因此，从基因表达调控方面研究肺癌发生发展的机制，了解肺癌治疗预测的相关因素，能更精准预测化疗疗效，优化治疗方案，提高肺癌患者的生活质量和远期生存率已经十分必要。microRNA（miRNA）是一类具有在转录后水平调控基因表达功能的非编码小分子miRNA，在细胞的生长、增殖、代谢、凋亡等方面都有着重要的作用。通过监测NSCLC患者血清miR系列基因化疗前后的变化，从而确定化疗效果。本研究涉及6个指标miR-19a、miR-19b-1、miR-20a、miR-17-3p、miR-18a和miR-92-1的血清检测，主要是观察比较NSCLC患者化疗前后血清miRNA的表达水平的改变，分析该改变对化疗疗效的影响，为血清miRNA在NSCLC治疗中的相关研究提供参考，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 病例收集 分别收集2011年3月～2016年9月间的225例经病理组织学或细胞检查证实的NSCLC患者，其中，200例采集抗癌治疗前的血清样本，作为NSCLC组，男133例，女67例，中位年龄65岁；另外，25例为晚期NSCLC患者，给予至少2个周期以上的常规一线化疗，分别采集化疗前和化疗2个疗程后的血清样本，作为治疗组，男16例，女9例，中位年龄63岁。选取100例正常体检且各项指标正常的健康体检者的血清样本，作为健康组，男63例，女37例，中位年龄59岁。三组对象在性别、年龄方面比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。按期整理临床治疗资料。
1.1.2 入选标准[1，2] 患者年龄18～75岁，男女不限；化疗患者具有化疗的指征，ECOG评分0～1分；生存时间≥3个月；具有可测量的病灶，胸片、普通CT或MRI扫描病灶≥20 mm，螺旋CT或PET-CT扫描病灶≥10 mm；机体上没有未愈合的创伤；体检符合要求，外周血象：WBC≥4.0×109/L，PLT≥80×109/L，Hb≥90 g/L。肾功能：Cr≤2.0×UNL（正常上限）。肝功能：BIL≤2.0×UNL，ALT/AST≤5.0×UNL。心电图基本正常；依从性好，配合血清样本采集。
1.1.3 排除标准[1，2] 不符合入选标准者；具有严重的心肺功能衰竭；腹泻（水样便）或麻痹性肠梗阻；无法进行疗效评价者；未得到控制的糖尿病；急性感染；孕妇和哺乳期妇女；健康组曾患有恶性肿瘤，NSCLC患者合并第二原发恶性肿瘤。
1.1.4 剔除标准[1，2] 未按上述标准入组并完成有关检查治疗者；因故和无故明显推迟给药时间超过2周者。观察期间合并使用其他抗肿瘤化疗药物者；化疗患者观察期间对靶病灶同时进行放疗者，或兼做其他抗肿瘤方案者。
1.2 方法
1.2.1 RNA分离提取 按照试剂说明书，血清的total RNA 使用microRNAs Isolation Kit（Applied Biosystems，Forster City，CA，USA）抽提。total RNA溶于DEPC處理水中，-80℃保存。RNA浓度使用Nanodrop 2100（Nanodrop，Wilmington，DE）测量。
1.2.2 实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）分析 差异表达使用两步方法的实时定量逆转录聚合酶链反应分析。第一步cDNA的反转录，第二步是实时定量逆转录聚合酶链反应。miRNA的反转录相关操作按照试剂盒One Step PrimeScript