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目的
确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA3304基因产物DAC合成c-di-AMP的活性，LA3303基因产物CdaR增强DAC酶活。
方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA3304基因，并构建其原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rDAC。采用高效液相色谱法(HPLC)检测rDAC环化ATP底物为c-di-AMP的活性。采用细菌双杂交法检测CdaR与DAC相互作用情况。构建细菌共表达系统，结合HPLC法检测CdaR增强DAC酶活情况。
结果所构建的问号钩体赖株LA3304基因原核表达系统在IPTG诱导下能高效表达rDAC，Ni-NTA亲和层析法提纯的rDAC经SDS-PAGE后显示为单一蛋白条带。rDAC具有体外合成ATP底物为c-di-AMP的功能。CdaR与DAC存在相互作用，CdaR可显著增强DAC酶活(P<0.05)。
结论LA3304基因产物DAC具有c-di-AMP合成酶活性，CdaR可增强DAC活性，并与DAC构成CdaR-DAC信号系统，共同参与调节钩体c-di-AMP合成。