【摘 要】
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目的 应用果蝇S2细胞表达甲型H1N1流感病毒可溶性HA蛋白,并评估其免疫活性.方法 以甲型H1N1流感A/Shenzhen/71/09病毒株作为模版,采用RT-PCR技术扩增HA基因,构建持续性表达载体pAC5.1-HA,协同筛选载体pCoblast共转染至S2细胞,通过Blasticindin抗生素筛选获得稳定转染的S2细胞株.利用Western Blot技术鉴定细胞上清HA蛋白表达,使用Ni
【机 构】
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目的 应用果蝇S2细胞表达甲型H1N1流感病毒可溶性HA蛋白,并评估其免疫活性.方法 以甲型H1N1流感A/Shenzhen/71/09病毒株作为模版,采用RT-PCR技术扩增HA基因,构建持续性表达载体pAC5.1-HA,协同筛选载体pCoblast共转染至S2细胞,通过Blasticindin抗生素筛选获得稳定转染的S2细胞株.利用Western Blot技术鉴定细胞上清HA蛋白表达,使用Ni亲和柱纯化重组HA蛋白.使用HA免疫BALB/c小鼠3次,利用ELISA检测HA特异性抗体效价.结果 成功克隆A/Shenzhen/71/09 HA基因,长度约1.7×103 bp.将HA基因克隆入pAC5.1-V5/His载体,经过转染、抗生素筛选后获得稳定表达HA的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,相对分子质量约75×103 D.免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体,免疫后10d、30 d效价分别为1∶1280、1∶5120.结论 获得可溶性表达的HA蛋白,并具有良好的免疫活性,为后期流感免疫诊断试剂的研制、亚单位疫苗的开发、单克隆抗体的制备奠定了基础。
其他文献
目的 对青海省2000-2011年流行麻疹野病毒进行分子流行病学研究,为消除麻疹提供科学依据.方法 使用B95a细胞或Vero/SLAM细胞从2000-2011年青海省6个地市麻疹暴发和散发病例的咽拭子标本中分离的麻疹病毒,用RT-PCR方法扩增N基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并与我国其他省份流行的麻疹病毒代表株基于N基因羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲
目的 探讨血清EB病毒VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平与鼻咽癌患者预后的关系.方法 140例初治无远处转移的鼻咽癌患者分别在治疗前和治疗结束后采用免疫酶法检测血清VCA/IgA和EA/IgA,ELISA法检测NA1/IgA和Rta/IgG.随访进行远期疗效和生存的评价.结果 治疗后患者血清VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA及Rta/IgG抗体水平较治疗
目的 探讨苏州地区儿童人类偏肺病毒的感染情况.方法 采集呼吸道感染患儿的鼻咽部分泌物,采用实时荧光定量PCR技术,检测人类偏肺病毒,回顾性分析苏州地区六年来人类偏肺病毒的感染情况.结果 17 828例患儿共检出人类偏肺病毒感染1184例,阳性率为6.44％,男、女童感染率分别为6.79％和6.38％.结论 男、女童之间的感染率差异无统计学意义,学龄前儿童感染率要高于学龄期儿童。
目的 分析陕西省发热呼吸道症候群患者咽拭子中16种呼吸道病毒病原谱构成和呼吸道合胞病毒基因特征.方法 2010年1月至2011年1月收集符合监测定义患者咽拭子标本208份,采用基于毛细管电泳的多重RT-PCR反应进行病毒核酸检测,包括人鼻病毒(HRV)、冠状病毒(HCOV)、流感病毒(Flu)、副流感病毒(HPIV)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(HRSV)、人偏肺病毒(HMPV)以及博卡病毒
目的 对2009-2012年甘肃省流感监测结果进行分析,为甘肃省的流感防控工作提供科学依据.方法 全省19家国家级流感监测哨点医院采集流感样病例的咽拭子,各地医疗机构送检流感样暴发疫情标本,以荧光定量PCR方法检测病毒核酸,用MDCK进行病毒分离培养,送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核及序列分析.结果 共采集流感样病例咽拭子36 892份,检测出流感核酸阳性8030例,检出率为21.77％,其
流感是一种由甲(A)、乙(B)和丙型(C)流感病毒引起的急性呼吸道传染病.根据甲型流感病毒的包膜糖蛋白,病毒可以分为1 ～16个血凝素(HA)和9个神经氨酸酶(NA)亚型,而这些均可从水禽体内分离出来[1].最近,人们又从蝙蝠的体内发现了H17亚型,但未能成功分离出病毒.按照病毒的致病性来分,可以将所有的H1-16亚型禽流感病毒分为高致病性、低致病性和无致病性禽流感病毒[2].至今为止,人们仅发现
目的 建立2012年确定的新冠状病毒的分子检测方法,并筛选优化引物与探针.方法 依据最先发表的208 bp长的新冠状病毒1b片段核酸序列,比对分析后设计合成常规RT-PCR引物1对及荧光定量RT-PCR引物1对与TaqMan探针2条(TZ1,TZ2),同时合成锁核酸修饰的TaqMan探针2条(LNA-TZ1,LNA-TZ2).建立检测新冠状病毒感染的常规RT-PCR方法与4种荧光定量RT-PCR,
目的 通过反向遗传学的技术手段,建立基于甲型H1N1流感大流行病毒A/California/07/2009(H1N1)的反向遗传平台系统,为今后疫苗株的研制及病毒的相关生物学研究提供技术基础.方法 分别扩增A/California/07/2009(H1N1)病毒的八个基因片段,利用PCI双表达质粒分别构建表达八个基因的重组质粒,共转染293T细胞拯救病毒.通过对拯救病毒的氨基酸序列测定、抗原性分析
目的 分析2011-2012年中国发热伴血小板减少综合征(SFTS)的疫情概况、流行特征和趋势.方法 对2011-2012年我国SFTS病例资料及监测资料进行流行病学分析.结果 2011-2012年间我国共报告SFTS病例1229例,平均发病率为0.046/10万,累计死亡107例,病死率8.7％.全国共16个省、市、自治区有报告病例.每年5～7月为发病高峰.报告病例以55～70岁年龄组居多,占总
目的 研制一种新的含竞争性内标引物,能同时检测EV71、CA16及通用型肠道病毒的四重实时荧光定量PCR诊断试剂盒,用于手足口病的临床诊断及流行病学监测.方法 设计特异性的EV71型、CA16型及其他型肠道病毒和内参基因的引物,改进病毒核酸提取方法,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的准确度、稳定性、精密度和扩增效率和检测线性范围.结果 本试剂盒的引物和探针特异性好,试剂盒采用的的病毒RN