【摘 要】
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目的 分析白花蛇舌草有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌(2-hydroxy-3-methylanthraquinone,HMA)对人胆囊癌(gallbladder carcinoma,GBC)细胞中的特征性蛋白表达谱的作用,并对差异信号通路采用生物信息学方法进行富集分析.方法 利用白花蛇舌草有效成分HMA处理GBC-SD细胞.提取经HMA处理和未经HMA处理的GBC细胞的总蛋白,应用串联质谱分析技术以及串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记蛋白定量技术对其差异表达蛋白进行筛选,在mRNA水
【机 构】
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519000广东珠海,珠海市人民医院普外二科
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目的 分析白花蛇舌草有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌(2-hydroxy-3-methylanthraquinone,HMA)对人胆囊癌(gallbladder carcinoma,GBC)细胞中的特征性蛋白表达谱的作用,并对差异信号通路采用生物信息学方法进行富集分析.方法 利用白花蛇舌草有效成分HMA处理GBC-SD细胞.提取经HMA处理和未经HMA处理的GBC细胞的总蛋白,应用串联质谱分析技术以及串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记蛋白定量技术对其差异表达蛋白进行筛选,在mRNA水平上采用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术定量验证差异蛋白编码基因;采用基因本体(gene ontology,GO)数据库对富集分析和注释差异表达蛋白,采用京都基因与基因组百科全书数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析差异蛋白所涉及的信号通路.结果 与对照组相比,经HMA处理的GBC-SD细胞鉴别出217个差异表达蛋白,其中153个表达上调,64个表达下调;在mRNA水平上对代表性差异蛋白的编码基因应用RT-qPCR技术进行验证,结果显示与蛋白组学结果一致.通过GO数据库分析,显示差异表达蛋白在代谢过程、调控过程中均发挥了重要的分子生物学作用;并广泛分布于细胞骨架、细胞膜和细胞器上.通过KEGG分析,结果显示若干和肿瘤发生发展关系密切的信号通路包括丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、Janus激酶/信号转导与转录激活子(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)、p53、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)、低氧诱导因子1(hy-poxia inducible factor 1,HIF-1)通路等均有差异表达蛋白的参与.结论 HMA处理后明显改变了GBC-SD细胞的蛋白表达谱,并使多条影响肿瘤发生发展的信号通路受到调控.基于TMT定量的蛋白组学分析为明确GBC的发病机制、治疗手段和初筛标记物提供了潜在依据.
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