【摘 要】
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目的为构建生物人工肝进行肝细胞的准备.方法采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力、单层、聚集培养及冻存复苏后培养的白蛋白、尿素合成功能进行检测.结果
【机 构】
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200025,上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科
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目的为构建生物人工肝进行肝细胞的准备.方法采用胶原酶半原位灌流法分离单个乳猪肝细胞,并对其活力、单层、聚集培养及冻存复苏后培养的白蛋白、尿素合成功能进行检测.结果采用本方法从每头乳猪中分离到的单个肝细胞数为(3.1±1.5)× 1010,活性超过95%.在加入激素和生长因子的培养基中单层培养时,肝细胞功能良好,可维持2周左右,而在未加入激素和生长因子的培养基中肝细胞虽能存活1周,但功能于24h后即丧失.球形聚集培养可实现肝细胞的大量培养,且生物学活性较单层培养显著提高.冻存复苏后肝细胞活力仍超过90%,肝细胞功能与新鲜分离培养的肝细胞功能间无明显差异.结论采用胶原酶半原位灌注法所得单个乳猪肝细胞基本满足构建生物人工肝对肝细胞数量的要求.聚集培养接种密度大,细胞生物学活性高,可用于构建生物人工肝.冻存复苏后肝细胞仍功能良好.
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