麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶高效可溶性表达及其部分酶学性质

• 作 者: 王晶晶 张新笑 卞欢 耿志明 李鹏鹏 王道营 徐
• 机 构: 江苏省农业科学院农产品加工研究所,南京农业大学肉品加工与质量控制教育部重点实验室,江苏省肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心
• 出 处: 南方农业学报
• 发表日期: 2019年5期
• 关键词: 麻鸭 磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(GPx4) 原核表达 纯化 酶学性质
• 基金项目: 国家自然科学基金青年科学基金项目(31701532);江苏省自然科学基金项目(BK20171324);江苏省农业科学院农产品加工研究所基金项目(JG201702)

[目的]克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。[方法]采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨酸突变体DGPx4表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→ Cys),并在大肠杆菌中通过添加His标签进行可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化得到融合蛋白DGPx4;采用总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒检测DGPx4活力以研究其酶学性质。[