【摘 要】
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目的 探讨以WT1基因为靶标治疗白血病的可行性,筛选有效抑制WT1基因表达的siRNA并观察其对K562细胞增生的影响.方法 制备特异性WT1 siRNA3条,转染HEK293细胞株,采用荧光定量R
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目的 探讨以WT1基因为靶标治疗白血病的可行性,筛选有效抑制WT1基因表达的siRNA并观察其对K562细胞增生的影响.方法 制备特异性WT1 siRNA3条,转染HEK293细胞株,采用荧光定量RT-PCR方法 检测WT1基因mRNA表达,Western blotting法检测WT1蛋白表达;MTY法检测细胞增生的影响.结果不同位点的siRNA对WT1基因抑制作用不同.si-wt1-1对WT1mRNA抑制明显(P＜0.05),si-wt1-2、si-wt1-3对WT1mRNA无抑制(P＞0.05).100 nmol/L si-wt1-1能使WT1mRNA的表达在转染后24h和48 h分别降低至对照组的(42.5±1.0)%(P＜0.05)、(25.3±1.5)%(P＜0.01),但72 h恢复至对照组水平.siRNA作用无明显剂量依赖性,不同浓度si-wt1-1对WT1mRNA抑制作用的比较差异无统计学意义(P＞0.05).Western blotting法榆测证实转染siRNA 48、72、96 h后,si-wt1-1对WT1蛋白抑制明显(P＜0.05),且96 h抑制作用最强;si-wt1-2、si-wt1-3无明显抑制作用(P＞0.05).si-wt1-1对K562细胞增生有抑制作用,si-wt1-1处理组与阴性对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA可有效抑制HEK293细胞WT1基因的表达,且mRNA水平抑制效果优于蛋白水平.si-wt1-1可有效抑制K562细胞的增生.
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