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【摘 要】目的：探討细胞色素CYP2D6基因多态性与急性髓系白血病（AML）易感性的关系。方法：采用病例对照研究方法，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术，对114例AML患者及180例健康对照者的CYP2D6（C188T）基因的多态分布进行分析。结果：AML患者组CYP2D6各基因型频率分布与对照组之间无显著性差异；携带CYP2D6 188T突变基因型的个体患AML的风险与野生型携带者相比无显著性差异。结论：CYP2D6 基因多态性可能与AML遗传易感性不相关。
【关键词】CYP2D6；基因多态性；急性髓系白血病；易感性
【中图分类号】R55 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）02-0288-02
细胞色素P450 （ cytochrome P450，CYP）作为机体内的Ⅰ相生物转化酶，参与了许多内源性和外源性化学物质的生物转化，并催化前致癌物转变为亲电子终致癌物，与DNA、RNA等结合而引起基因突变、染色体畸变和肿瘤发生[1，2]。研究表明CYP基因型多态性决定了不同个体对不同致癌物代谢的差异性和肿瘤易感性。目前认为与急性髓系白血病（ acute myelogenous leukemia，AML）发生相关的CYP多态性基因包括CYP1A1、CYP2E1、CYP2D6和CYP3A4等[3-5]。CYP2D6是目前研究得最深入的一种细胞色素氧化酶，其基因多态性与AML易感性的关系国外已有报道，但研究结果并不一致，而国内少有报道。本研究分析河南人群的CYP2D6 多态性基因型对AML发生的影响， 为AML的风险评估和预防提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 DNA提取 收集经临床诊断及骨髓细胞学确诊的AML患者114例；健康对照组180例，均来自无肿瘤及家族史的体检者，且与AML患者组的年龄和性别分布均衡。采集上述AML 患者和对照个体的静脉血标本， 以酚-氯仿法提取外周血基因组DNA。
1.2 CYP2D6基因多态性的PCR-RFLP 分析用于扩增的PCR 引物为F： 5，-CACTGGCTCCAACGCTGGGCTGCACGGTA-3，和R： 5，-TAGCTTCTGGTCCAGCCTGT GGTTTCA-3，，扩增片段长210 bp，50μL PCR 体系中含10 ×PCR 缓冲液5μL、基因组DNA 100 ng、引物各10pmo l/L、dNTPs 200μmo l/L、Taq 聚合酶2 U。94 ℃预变性5 min后， 置94 ℃ 30 s、62 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s， 32次循环后于72 ℃ 延伸5m in；以10U KpnⅠ限制酶消化PCR 产物；以含0.5 g /L溴乙锭的3%琼脂糖凝胶电泳分离PCR酶切产物。分析显示：野生型呈现180 bp单一区带（30 bp片段已泳离凝胶）， 杂合突变型呈现210 bp和180 bp两个片段， 纯合突变型呈现210 bp单一片段（图1）。
1.3 统计学分析采用SPSS17.0软件包进行统计分析，包括：χ2检验比较CYP2D6 各基因型频率在病例组和对照组的分布差异；非条件Logistic 回归分析各基因型对AML易感性的影响， 以OR及95%CI表示相对危险度。
2 结果
CYP2D6 （C188T）多态位点的野生型、杂合突变型及纯合突变型在AML组的分布频率与对照组比较均无显著性差异，其多态与AML的发生无显著相关性（表1）。
3 讨论
CYP2D6 基因位于人类22号染色体22q13.1，编码异哇胍羟化酶，主要参与亚硝胺的代谢，其多态基因型直接影响酶活性。CYP2D6 （C188T）多态引起高度保守区Pro34→Ser，导致CYP2D6酶活性降低，而成为某些环境诱导疾病的易感因素。本研究表明：AML患者组CYP2D6各基因型频率分布与对照组之间无显著性差异；携带CYP2D6 188T突变基因型的个体患AML的风险与野生型携带者相比无显著性差异。深入研究易感基因多态性与AML发生、治疗及转归的关系具有重要临床意义，从而为筛查AML易感人群和早期诊断提供理论依据。
参考文献：
[1] Ekins S， Wrighton SA. The role of CYP2B6 in human xenobiotic metabolism[J].Drug Metab Rev，1999 ，31（3）：719-754.
[2] Code EL， et al. Human cytochrome P4502B6： interindividual hepatic expression， substrate specificity， and role in procarcinogen activation[J].Drug Metab Dispos， 1997，25（8）：985-993.
[3] Dong LM， et al. Genetic susceptibility to cancer： the role of polymorphisms in candidate genes[J].JAMA，2008 ，299（20）：2423-2436.
[4] Lemos MC， et al. Genetic polymorphism of CYP2D6， GSTM1 and NAT2 and susceptibility to haematological neoplasias[J].Carcinogenesis， 1999，20（7）：1225-1229.
[5] Roddam PL， et al. Poor metabolizers at the cytochrome P450 2D6 and 2C19 loci are at increased risk of developing adult acute leukaemia[J]. Pharmacogenetics， 2000 ，10（7）：605-615.
【关键词】CYP2D6；基因多态性；急性髓系白血病；易感性
【中图分类号】R55 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）02-0288-02
细胞色素P450 （ cytochrome P450，CYP）作为机体内的Ⅰ相生物转化酶，参与了许多内源性和外源性化学物质的生物转化，并催化前致癌物转变为亲电子终致癌物，与DNA、RNA等结合而引起基因突变、染色体畸变和肿瘤发生[1，2]。研究表明CYP基因型多态性决定了不同个体对不同致癌物代谢的差异性和肿瘤易感性。目前认为与急性髓系白血病（ acute myelogenous leukemia，AML）发生相关的CYP多态性基因包括CYP1A1、CYP2E1、CYP2D6和CYP3A4等[3-5]。CYP2D6是目前研究得最深入的一种细胞色素氧化酶，其基因多态性与AML易感性的关系国外已有报道，但研究结果并不一致，而国内少有报道。本研究分析河南人群的CYP2D6 多态性基因型对AML发生的影响， 为AML的风险评估和预防提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 DNA提取 收集经临床诊断及骨髓细胞学确诊的AML患者114例；健康对照组180例，均来自无肿瘤及家族史的体检者，且与AML患者组的年龄和性别分布均衡。采集上述AML 患者和对照个体的静脉血标本， 以酚-氯仿法提取外周血基因组DNA。
1.2 CYP2D6基因多态性的PCR-RFLP 分析用于扩增的PCR 引物为F： 5，-CACTGGCTCCAACGCTGGGCTGCACGGTA-3，和R： 5，-TAGCTTCTGGTCCAGCCTGT GGTTTCA-3，，扩增片段长210 bp，50μL PCR 体系中含10 ×PCR 缓冲液5μL、基因组DNA 100 ng、引物各10pmo l/L、dNTPs 200μmo l/L、Taq 聚合酶2 U。94 ℃预变性5 min后， 置94 ℃ 30 s、62 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s， 32次循环后于72 ℃ 延伸5m in；以10U KpnⅠ限制酶消化PCR 产物；以含0.5 g /L溴乙锭的3%琼脂糖凝胶电泳分离PCR酶切产物。分析显示：野生型呈现180 bp单一区带（30 bp片段已泳离凝胶）， 杂合突变型呈现210 bp和180 bp两个片段， 纯合突变型呈现210 bp单一片段（图1）。
1.3 统计学分析采用SPSS17.0软件包进行统计分析，包括：χ2检验比较CYP2D6 各基因型频率在病例组和对照组的分布差异；非条件Logistic 回归分析各基因型对AML易感性的影响， 以OR及95%CI表示相对危险度。
2 结果
CYP2D6 （C188T）多态位点的野生型、杂合突变型及纯合突变型在AML组的分布频率与对照组比较均无显著性差异，其多态与AML的发生无显著相关性（表1）。
3 讨论
CYP2D6 基因位于人类22号染色体22q13.1，编码异哇胍羟化酶，主要参与亚硝胺的代谢，其多态基因型直接影响酶活性。CYP2D6 （C188T）多态引起高度保守区Pro34→Ser，导致CYP2D6酶活性降低，而成为某些环境诱导疾病的易感因素。本研究表明：AML患者组CYP2D6各基因型频率分布与对照组之间无显著性差异；携带CYP2D6 188T突变基因型的个体患AML的风险与野生型携带者相比无显著性差异。深入研究易感基因多态性与AML发生、治疗及转归的关系具有重要临床意义，从而为筛查AML易感人群和早期诊断提供理论依据。
参考文献：
[1] Ekins S， Wrighton SA. The role of CYP2B6 in human xenobiotic metabolism[J].Drug Metab Rev，1999 ，31（3）：719-754.
[2] Code EL， et al. Human cytochrome P4502B6： interindividual hepatic expression， substrate specificity， and role in procarcinogen activation[J].Drug Metab Dispos， 1997，25（8）：985-993.
[3] Dong LM， et al. Genetic susceptibility to cancer： the role of polymorphisms in candidate genes[J].JAMA，2008 ，299（20）：2423-2436.
[4] Lemos MC， et al. Genetic polymorphism of CYP2D6， GSTM1 and NAT2 and susceptibility to haematological neoplasias[J].Carcinogenesis， 1999，20（7）：1225-1229.
[5] Roddam PL， et al. Poor metabolizers at the cytochrome P450 2D6 and 2C19 loci are at increased risk of developing adult acute leukaemia[J]. Pharmacogenetics， 2000 ，10（7）：605-615.