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目的 探索细胞色素C氧化酶亚单位Ⅲ(COX Ⅲ)与乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的具体结合位点. 方法 构建pAS2-1-X变异体重组载体,醋酸锂转化法将其转入酵母细胞,通过PCR法及测序法证实目的片段转入酵母细胞;Western blot法明确变异体蛋白在酵母细胞中能否正确表达,滤膜转印法排除自身激活作用;固体培养基交合实验及β-半乳糖苷酶活性实验检测HBx和COX Ⅲ的结合区域. 结果 成功构建含HBx第1～ 72位氨基酸的变异体重组载体pAS2-1-X1和第1～ 117位氨基酸的变异体重组载体pAS2-1-X2,测序及PCR均证实片段的正确性.Western blot证实变异体蛋白在酵母细胞中可正确表达,且变异体蛋白无自身激活作用.交合实验及β-半乳糖苷酶活性检测将HBx和COX Ⅲ的结合区域定位于72 ～ 117位氨基酸. 结论 通过酵母双杂合实验证实HBx和COX Ⅲ的结合区域定位于72 ～ 117位氨基酸,此结合区域的明确有望帮助进一步阐明X蛋白在体内的作用机制,并可能为慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌的防治提供新思路。