影响根癌农杆菌EHA105感受态细胞转化效率因素的研究

• 作 者: 高世武 郭晋隆 阙友雄 许莉萍 杨颖颖 陈如凯
• 机 构: 福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点开放实验室
• 出 处: 热带生物学报
• 发表日期: 2012年01期
• 关键词: 根癌农杆菌EHA105 生长曲线 冻融法 转化率
• 基金项目: 国家自然科学基金项目(30871581);国家高技术研究发展“863”计划863项目(2007AA100701);福建省科技厅国家科技项目(F2007AA100701);现代农业产业技术体系建设专项资金项目(nycytx-024-01-06)

通过对EHA105菌株48 h不间断培养观察,绘制出其生长曲线图;同时用不同浓度的CaCl2溶液分别制备根癌农杆菌EHA105的感受态细胞,在转化过程中用不同的温度进行热激处理,统计分析阳性转化子个数,明确了采用冻融法将外源DNA导入农杆菌EHA105时的几个影响因素的参数。结果表明,当OD600值在1.0～1.5之间时,根癌农杆菌EHA105正处在对数生长期,活力最强;制备感受态细胞时,CaCl2溶液的浓度在6～10 mmol.L-1之间,无显著差异,但以10 mmol.L-1效果最佳,转化率达5.322×106.μg-1,热激处理温度在20～37℃之间均无显著差异,但37℃处理时转化率最高,达5.550×106.μg-1。