杂合抗菌肽HMCM的原核表达及其活性鉴定

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将哺乳动物抗菌肽(Hexapeptide)、两栖类抗菌肽(Magainin)、昆虫抗菌肽(Cecropin A和Melittin)的有效作用部分拼接在一起,以获得一种新型的杂合抗菌肽HMCM.根据HMCM氨基酸序列和大肠杆菌B细胞的密码子偏好性设计了HMCM的基因序列;将目的基因克隆到原核表达载体pET-32a-c(+),构建了重组表达载体pET-32a-HMCM;再转化原核表达菌株E.coli BL21( DE3)实现融合表达,通过摸索诱导时间、IPTG浓度、OD600和温度等条件确定了表达最佳条件,并确定了融合蛋白以可溶形式存在;通过亲和层析纯化了融合蛋白,并进行了Western-blotting鉴定;最后用EK酶酶切融合蛋白释放出HMCM,对HMCM的抗菌性进行了初步研究.结果表明HMCM对枯草芽孢杆菌有良好的抑菌作用.
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