【摘 要】
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目的 探讨血小板反应素4(Thbs4)基因编辑骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对糖尿病后肢缺血大鼠血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素-1(Ang-1)的影响及相关作用机制.方法 将30
【机 构】
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牡丹江医学院 157011中国科学院大学深圳医院血管外科,深圳,518107;深圳市罗湖区人民医院肿瘤康复科,深圳,518000;牡丹江医学院附属红旗医院心血管内科 157011;
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目的 探讨血小板反应素4(Thbs4)基因编辑骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对糖尿病后肢缺血大鼠血管内皮生长因子(VEGF)和促血管生成素-1(Ang-1)的影响及相关作用机制.方法 将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为模型组、模型+BMSCs治疗组及模型+Thbs4-BMSCs治疗组,每组10只.各组大鼠在构建Ⅱ型糖尿病后肢缺血模型后,分别于缺血损伤区局部注射100μl的生理盐水、BMSCs悬液和Thbs4-BMSCs悬液(细胞数为2×106个).干细胞移植后第14天处死大鼠,取缺血区域附近的肌肉组织,分别采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测VEGF及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白的表达,免疫荧光染色检测Ang-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测VEGF和Ang-1基因的mRNA表达,免疫组化染色检测血管性血友病因子(vWF)蛋白的表达.结果 模型+Thbs4-BMSCs治疗组的VEGF、Ang-1及vWF蛋白表达均明显高于模型组和模型+BMSCs治疗组(VEGF蛋白:P<0.01,P<0.05);VEGF和Ang-1基因的mRNA表达较模型组和模型+BMSCs治疗组均明显上调,差异均具有统计学意义(VEGF mRNA:均P<0.01;Ang-1 mRNA:P<0.01,P<0.05);p-Smad2/3蛋白表达也明显高于模型组和模型+BMSCs治疗组(均P<0.01),且加入p-Smad2/3通路抑制剂后p-Smad2/3蛋白表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Thbs4-BMSCs移植治疗糖尿病后肢缺血大鼠可有效促进缺血损伤区域促血管生成因子VEGF和Ang-1的表达,其促血管生成作用可能与激活Smad2/3信号通路有关.
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