血小板反应蛋白1活性片段VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞增生及迁移的影响

• 作 者: 田润 梅妍 陈臻 方林 李小芹
• 机 构: 650032 昆明，云南省第一人民医院眼科,650032 昆明，云南省第一人民医院眼科,650032 昆明，云南省第一人民医院眼科,650032 昆明，云南省第一人民医院眼科,650032 昆明，云南
• 出 处: 中华眼底病杂志
• 发表日期: 2015年31期
• 关键词: 凝血酶敏感蛋白1/药物作用 内皮细胞/病理生理学 细胞增殖 细胞迁移抑制

目的

观察血小板反应蛋白1(TSP-1)活性片段VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞(RF/6A)增生、迁移的影响。

方法

培养RF/6A细胞并将其分为对照组，0.1、1.0、10.0 μg/ml VR-10合成多肽组及1.0 μg/ml TSP-1全肽组。细胞培养后6、12、24、48 h，采用噻唑蓝(MTT)法检测各组RF/6A细胞存活率。细胞培养后24 h，Transwell小室实验检测各组RF/6A细胞迁移抑制率。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测10.0 μg/ml VR-10合成多肽对细胞中半胱天冬酶(caspase)-3、凋亡相关因子(FAS)蛋白表达的影响。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测10.0 μg/ml VR-10合成多肽对RF/6A细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、FAS配体(FASL)mRNA表达的影响。

结果

MTT法检测结果显示，随作用时间延长，干预组RF/6A细胞存活率越低；随VR-10合成多肽浓度增加，RF/6A细胞存活率也越低。以作用48 h时10.0 μg/ml VR-10合成多肽组RF/6A细胞存活率最低，为78%。细胞培养24 h后，10.0 μg/ml VR-10合成多肽组RF/6A细胞迁移抑制率最高，1.0 μg/ml TSP-1全肽组次之。与对照组比较，不同浓度VR-10合成多肽组及1.0 μg/ml TSP-1全肽组RF/6A细胞迁移抑制率均明显增加，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示，在相对分子质量32×10³、20×10³处可见caspase-3蛋白条带，在相对分子质量48×10³处可见FAS蛋白条带。10.0 μg/ml VR-10合成多肽组与对照组RF/6A细胞中caspase-3(t＝－66.240、138.813)、FAS(t＝163.114)蛋白表达比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，10.0 μg/ml VR-10合成多肽组bcl-2 mRNA表达明显降低，差异有统计学意义(t＝－67.419，P＝0.000)；FASL mRNA表达明显增强，差异也有统计学意义(t＝39.365，P＝0.001)。

结论

TSP-1活性片段VR-10合成多肽能抑制RF/6A细胞增生、迁移。