三磷酸腺苷结合盒转运子A1在真核细胞中的表达及对细胞抗砷性的影响

• 作 者: 杨丽 谢菁 仙玲玲 张金莉 徐文静
• 机 构: 832002,新疆石河子大学医学院医学遗传学教研室,832002,新疆石河子大学医学院医学遗传学教研室,832002,新疆石河子大学医学院医学遗传学教研室,832002,新疆石河子大学医学院医学遗传学
• 出 处: 中华地方病学杂志
• 发表日期: 2010年29期
• 关键词: 三磷酸腺苷结合盒转运子A1 质粒 转染 真核细胞 抗砷性 ATP-binding cassette transporter A1 gene Plasmids T

目的 研究含有三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)基因的真核表达载体pcDNA3.1/ABCA1转染真核细胞后,在细胞中的表达及对细胞抗砷性的影响.方法 由脂质体介导将pcDNA3.1/ABCA1重组质粒转染入人HeLa细胞中(转染重组质粒组),同时设转染空质粒组及未转染组作为对照,用实时定量PCR法检测各组细胞ABCA1 mRNA表达水平,用蛋白免疫印记法(Western blot)检测ABCA1蛋白的表达.转染48 h后,以不同剂量[0(对照)、4、8、16、32、64、128 μmol/L]亚砷酸钠(NaAsO2)染毒,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存率.结果 转染重组质粒组、转染空质粒组及未转染组ABCA1 mRNA表达量分别为(2.09±0.08)×10-4、(0.09±0.02)×10-4、(0.08±0.02)×10-4,组间比较差异有统计学意义(F=1499.23,P<0.01),其中转染重组质粒组ABCA1 mRNA表达量高于转染空质粒组和未转染组(P均<0.01).转染重组质粒组、转染空质粒组及未转染组在相对分子质量(Mr)为254 × 103处均有特异性蛋白条带,其大小与ABCA1蛋白大小相符,且转染重组质粒组蛋白表达量明显高于转染空质粒组及未转染组.在NaAsO2剂量为4、8、16、32、64、128μmol/L时,转染重组质粒组细胞生存率[(94.8±0.9)%、(86.5±2.6)%、(77.8±2.0)%、(56.0±2.0)%、(23.8±1.7)%、(18.6±0.6)%]均高于转染空质粒组[(85.3±1.1)%、(78.7±0.6)%、(67.8±2.4)%、(43.2±1.5)%、(14.5±1.3)%、(8.0±0.4)%],二者比较差异有统计学意义(t值分别为18.985、6.689、5.922、9.504、9.481、32.634,P均<0.01).结论 ABCA1基因经转染后在HeLa细胞中呈现高表达状态,并使HeLa细胞对砷的耐受性提高。