细菌内同源重组法高效制备携带增强型绿色荧光蛋白与人内皮型一氧化氮合酶cDNA的重组腺病毒载体

• 作 者: 谭艳 王家宁 郭凌郧 孔霞 唐俊明 张少峰 黄永章 罗超
• 机 构: 郧阳医学院,郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,郧阳医学院基础医学研究所,郧阳医学院药理学教研室,郧阳医学院生理学教研室
• 出 处: 郧阳医学院学报
• 发表日期: 2007年2期
• 关键词: 同源重组 人内皮型一氧化氮合酶 基因治疗 腺病毒 绿色荧光蛋白 Homlogous Recombination Human Endothelial Nitric
• 基金项目: 国家自然科学基金（No：30600614）,教育部重点项目（No：207072）,湖北省自然科学基金（No：2006ABA342）,教育厅中青年项目（No：Q200624003）.

目的：利用细菌内同源重组法快速构建携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和人内皮型一氧化氮合酶（he—NOS）cDNA的重组腺病毒质粒和制备表达EGFP和heNOS的重组腺病毒。方法：质粒载体pHCMVSP1A—heNOS用EeoR Ⅰ酶切，回收heNOScDNA，亚克隆至腺病毒穿梭质粒中，形成转移质粒pShuttle—heNOS—EGFP；然后用Pme Ⅰ线性化后的pShuttle—heNOS—EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ 5183，使其在细菌内发生同源重组，获得阳性重组质粒p