【摘 要】
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目的 利用CRISPR/Cas9系统建立钙结合蛋白S100a9基因外显子定向敲除小鼠.方法 在S100a9基因第1个外显子5 端及第2个外显子3 端设计gRNA靶点,体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白体
【机 构】
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100029,首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室科研基地建设-心血管重大疾病协同创新中心;
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目的 利用CRISPR/Cas9系统建立钙结合蛋白S100a9基因外显子定向敲除小鼠.方法 在S100a9基因第1个外显子5 端及第2个外显子3 端设计gRNA靶点,体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白体外检测gRNA切割效率.选取效率高的gRNA和Cas9 mRNA注射C57BL/6小鼠受精卵,进行胚胎移植,利用PCR和测序方法检测F0代小鼠S100a9基因外显子敲除情况. 结果 F0代出生9只小鼠,PCR鉴定其中4只具有长片段删除,效率为44.4％;测序鉴定3只小鼠完全敲除了第1和第2外显子,1只敲除了第2外显子. 结论 成功建立利用CRISPR/Cas9系统定向敲除基因外显子的方法,获得了S100a9基因第1和第2外显子敲除的小鼠.
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