【摘 要】
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目的构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株.方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列,设计PCR引物,扩增并克隆
【机 构】
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第一军医大学流行病学教研室,中国预防医学科学院流行病微生物学研究所,第一军医大学南方医院感染内科
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目的构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株.方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列,设计PCR引物,扩增并克隆了irp6结构基因,在体外进行精确突变后,插入氯霉素抗性基因.再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒pKNG101中,构建成irp6基因重组自杀质粒pKH6,并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggEC 17-2为出发菌株,通过体内同源重组,置换其irp6基因.结果经接合转移和同源重组,利用蔗糖抗性筛选,pKH6上的同源序列有效
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