【摘 要】
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目的制备结缔组织生长因子(CTGF)抗原,建立ELISA检测方法.方法从血管内皮细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异性引物,通过PCR方法扩增CTGF C区242～349位氨基酸基因,插入
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目的制备结缔组织生长因子(CTGF)抗原,建立ELISA检测方法.方法从血管内皮细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异性引物,通过PCR方法扩增CTGF C区242～349位氨基酸基因,插入噬菌体包膜蛋白基因Ⅲ的上游,制备CTGF融合蛋白.用纯化后的融合蛋白免疫家兔,获得抗体,抗体纯化后标记HRP,建立ELISA.结果成功克隆CTGF C区基因,插入表达载体经IPTG诱导后获得分子量为25 000的融合蛋白,免疫学检测证实为CTGF.所得抗体用HRP标记.建立的ELISA法检测灵敏度为2 ng/ml,批内及批间平均变异系数为5.4%和7.5%,平均回收率为104.2%.血红蛋白浓度在0～50 mmol/L,总胆红素在0～150 μmol/L,三酰甘油在0～2.0 mmol/L对测定结果无影响.2例慢性乙型肝炎病人血标本,5例糖尿病肾病、3例肾功能衰竭、3例慢性肾炎尿标本为阳性.结论 CTGF可以作为判断纤维化发生、进展及预后的一个新指标.CTGF ELISA检测方法的成功建立,为临床应用打下基础.
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