人Pokemon蛋白锌指结构域的表达与纯化

• 作 者: 刘莉 李岳亭 张萌萌 杨予涛 徐志卿
• 机 构: 首都医科大学基础医学院,嘉兴出入境检验检疫局
• 出 处: 生物技术通报
• 发表日期: 2015年2期
• 关键词: 锌指结构域 原核表达 蛋白纯化 Pokemon Pokemon Zinc finger prokaryotic expression protein purif
• 基金项目: 国家“973”计划（2010CB912003）,国家自然科学基金项目（31271154,31171032）1高等学校博士学科点专项科研基金项目（20111107120011）,北京市教委科技发展计划（KM201310025001）

旨在原核表达Pokemon基因的锌指结构域，纯化获得GST-Zinc finger的融合蛋白。以人胶质瘤T98G细胞的cDNA为模板，利用PCR扩增带有BamH I和Sal I酶切位点的人Pokemon基因的锌指结构域，然后将其克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中。将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达，再利用MagneGST particles亲和纯化Zinc finger融合蛋白，最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。结果显示，成功构建pGEX-4T-1-Zin