【摘 要】
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目的克隆人B淋巴细胞刺激因子(B-lymphocyte stimulator,BLyS)胞外区cDNA,并行高效表达、纯化及功能鉴定.方法提取HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人BLyS胞外区78-285氨基酸
【机 构】
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第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038
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目的克隆人B淋巴细胞刺激因子(B-lymphocyte stimulator,BLyS)胞外区cDNA,并行高效表达、纯化及功能鉴定.方法提取HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人BLyS胞外区78-285氨基酸cDNA,行序列测定后,构建高效原核表达载体pQE-80L,经IPTG诱导表达及Ni-NTA层析纯化,SDS-PAGE和Wester blot检测活性.结果RT-PCR扩增得到627bp的DNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码BLyS 78-285的cDNA序列一致,并在大肠杆菌中得到高效表达,纯化后纯度可达95%,并能刺激B淋巴细胞增殖.结论成功克隆人BLyS胞外区cD-NA,并获得了高效表达,纯化产物具有生物学活性,为进一步研究奠定了基础.
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