蓬乱蛋白2干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在hUVECs中的表达

• 作 者: 生欣 王俊华 刘月华 郜双林 谢夏丹 范芳
• 机 构: 遵义医学院基础医学院生物化学教研室
• 出 处: 中国现代医学杂志
• 发表日期: 2019年1期
• 关键词: 蓬乱蛋白2/Wnt蛋白质类 慢病毒载体 内皮细胞 RNA干扰 过表达
• 基金项目: 国家自然科学基金(No:31360278);遵义医学院博士启动基金项目(No:F566)

目的获得蓬乱蛋白2(DVL2)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并在人脐静脉内皮细胞中(hUVECs)稳定表达。方法①聚合酶链反应扩增目的基因,设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒为基础构建DVL2干扰和过表达载体,酶切电泳、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和测序技术鉴定载体构建是否成功;②以3质粒系统在HEK293T细胞中包装病毒,通过荧光显微镜观察计数并计算病毒滴度;以嘌呤霉素筛选稳定转染的hUVECs,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为BC组(hUVECs空白对照)、NC