【摘 要】
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目的检测Rev(HIV的调控基因)依赖性肿瘤坏死因子受体(TNFR-1)和gp160双重表达质粒pDM128-TNFR-1(pT128)的凋亡诱导功能. 方法采用基因枪转导及流式细胞仪检测新质粒的表达功
【机 构】
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同济大学附属同济医院皮肤科,Microbiology,Macfalane
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目的检测Rev(HIV的调控基因)依赖性肿瘤坏死因子受体(TNFR-1)和gp160双重表达质粒pDM128-TNFR-1(pT128)的凋亡诱导功能. 方法采用基因枪转导及流式细胞仪检测新质粒的表达功能. 结果新结构具有特异的选择性表达作用.当Rev存在时,能间接表达TNFR-1,明显诱导HeLa细胞凋亡,使绿荧光细胞百分率非常显著地低于阴性对照(P＜0.01).等质量转染时,TNFR-1表达量少于Hu p60 TNFR-1的pDC302(pT60),故间接表达不及单纯pT60的直接表达,绿荧光细胞百分率显著高于pT60转染组(P＜0.01).培养40?h,才有明显杀伤功能并接近单纯pT60,差异无显著性(P＞0.01).单纯pT128不能直接表达TNFR-1,绿荧光细胞百分率非常显著地高于单纯pT60转染组(P＜0.01),接近阴性对照,培养40?h时差异无显著性(P＞0.01).当AD8或pMD+pRnv存在并表达Rev时,pT128均能表达TNFR-1,杀伤HeLa细胞,绿荧光细胞百分率非常显著地低于阴性对照(P＜0.01).pT128与pRev或AD8转染人正常的角质生成细胞时,能表达TNFR-1,诱导细胞凋亡.培养72?h后,阴性对照和单纯pT128组的绿荧光角质生成细胞数皆显著地超过pT128+pRev和pT128+pAD8组(P＜0.01). 结论 pT128可调控的凋亡诱导保证了HIV DNA疫苗足量的抗原表达、凋亡体形成、APC表型激发及特异性抗凋亡体免疫记忆建立.单纯pT128并不对机体产生明显伤害.此结构还适用于不同类型的HIV抗原表达系统并具有HIV感染细胞杀伤功能,能够方便地在人皮肤中表达抗原,诱导凋亡体形成.可作为HIV DNA疫苗的研究策略之一.
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