目的 观察顺铂（DDP）作用下肺癌A549细胞系的细胞周期和凋亡的动力学特点，以及灭活细胞周期检测点激酶1（Chk1）和细胞周期检测点激酶2（Chk2）基因对DDP诱导的肺癌细胞凋亡的影响。方法 优化转染条件后，将肺癌A549细胞分为8组进行转染，分别为正常组（未经任何处理的A549细胞）、对照组（A549细胞接受10μmol/L的DDP作用12h）、转染Chk1正义寡核苷酸链（sODN）组、转染Chk1反义寡核苷酸链（AsODN）组、转染Chk2sODN组、转染Chk2AsODN组、联合转染Chk1和Chk2sODN组以及联合转染Chk1和Chk2AsODN组，其中后6组转染24h后再以10μmol/L的DDP处理12h。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法，检测转染Chk1或Chk2sODN、AsODN后，A549细胞中Chk1或Chk2mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞仪Annexin V-FITC法和Sub-G1法，检测转染Chk1和（或）Chk2 sODN、AsODN后，DDP作用下A549细胞的细胞周期和凋亡变化。结果 10μmol/L的DDP作用12h后，非同步化处理的A549细胞出现了明显的S期阻滞现象。转染24h后，Chk1或Chk2AsODN可明显抑制A549细胞中Chk1mRNA和蛋白或Chk2 mRNA和蛋白的表达。与单独转染Chk1或Chk2sODN组相比，单独转染Chk1或Chk2 AsODN组DDP诱导下A549细胞的凋亡率约提高了1-2倍（P〈0.05）；但联合转染Chk1和Chk2 AsODN组与单独转染Chk1 AsODN或Chk2 AsODN组相比，A549细胞凋亡率的差异无统计学意义（P=0.521和P=0.339）。结论 灭活Chk1和Chk2基因引起化疗增敏的机制可能是通过解除S期阻滞这种肿瘤细胞的自我保护机制实现的，Chk1和Chk2基因可作为肺癌化疗药物增敏治疗的有效靶点。
灭活细胞周期检测点激酶基因对顺铂诱导肺癌细胞凋亡的影响
【摘 要】
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目的 观察顺铂（DDP）作用下肺癌A549细胞系的细胞周期和凋亡的动力学特点，以及灭活细胞周期检测点激酶1（Chk1）和细胞周期检测点激酶2（Chk2）基因对DDP诱导的肺癌细胞凋亡的影响。方法 优化转染条件后，将肺癌A549细胞分为8组进行转染，分别为正常组（未经任何处理的A549细胞）、对照组（A549细胞接受10μmol/L的DDP作用12h）、转染Chk1正义寡核苷酸链（sODN）组、转染
【机 构】
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华中科技大学附属同济医院外科,武汉430030,华中科技大学附属同济医院外科,武汉430030,肿瘤生物治疗中心,肿瘤生物治疗中心
【发表日期】
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2009年31期
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