【摘 要】
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目的:构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究.方法:
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院检验学部,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院儿科,江苏南京,210029
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目的:构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究.方法:采用PCR方法扩增人cGAS基因5'上游1 254 bp(-1 178～+76 bp)的片段,酶切后连接到pGL3-basic质粒,以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒.通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性,利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点.通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点.结果:人cGAS启动子质粒初步构建成功.转染后,cGAS启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加(P＜0.05).人cGAS近端启动子区域(-414～+76 bp)经生物信息学软件分析可能含有Sp1、CREB、USF1、RAP1、C-JUN、OCT-1等转录因子的结合位点.点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域.结论:人cGAS近端启动子区域(-414～+76 bp)存在较强的启动子活性,该区域含有多个潜在的转录因子结合位点.转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区.
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