Ki-67启动子转录调控结构与功能研究

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目的 观察Ki-67核心启动子调控元件对转录调控的影响.方法 根据Ki-67启动子结构软件分析结果,对Ki-67核心启动子(-223~+30)内的5个调控区域,包括(+13~+30)及4个潜在Sp1结合位点(-198~-172)、(-170~-144)、(-63~-37)和(-14~+12)进行内部缺失,目的片段缺失的Ki-67核心启动子插入pGL3-Basic载体,构建报告基因重组体质粒.将重组体分别转染肿瘤Hela、SW1990、SGC-7901、A549细胞株,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,并与Ki-67核心启动子质粒pGLBK2+转录活性比较.结果 缺失(+13~+30)的启动子重组体质粒在4种肿瘤细胞的转录功能均有显著提高,分别达到缺失前的1.2、2.0、1.7、1.4倍.缺失潜在Sp1结合位点的4个启动子重组体在4种肿瘤细胞的转录功能均有显著降低,其中缺失(-170~-144)后转录活性最小,在4种肿瘤细胞中分别降至未缺失前的16.2%、10.4%、6.7%、12.2%.结论 Ki-67启动子(+13~+30)区包含负性调控元件,对其缺失后形成的新的Ki-67核心启动子(-223~+12)是更好的调控肿瘤基因治疗的启动子.(-198~-172)、(-170~-144)、(-63~-37)和(-14~+12)可能存在潜在的Sp1顺式作用元件,其中-170~-144区域的顺式作用元件最为重要。

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