食管鳞癌中微小核糖核酸-21的作用及对靶蛋白的影响

• 作 者: 刘涛 刘清 马文静 阿孜古丽·吐尔逊 郑树涛 伊力亚尔·夏合丁 马正海 卢晓梅
• 机 构: 830054乌鲁木齐，新疆医科大学第一附属医院中心实验室新疆维吾尔自治区食管癌研究所,830054乌鲁木齐，新疆医科大学第一附属医院中心实验室新疆维吾尔自治区食管癌研究所,830054乌鲁木齐，新疆医
• 出 处: 中华消化杂志
• 发表日期: 2011年31期
• 关键词: 癌 鳞状细胞 食管肿瘤 微小核糖核酸 寡核苷酸类 反义 细胞凋亡

目的 探讨微小RNA(miRNA)-21对食管鳞癌细胞Eca109和哈萨克族食管癌的促增殖作用及对程序性细胞死亡基因4(PDCD4)表达的影响。方法将食管鳞癌细胞系Eca109分为miRNA-21 Mimics组（转染序列5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）、miRNA-21抑制剂组（转染序列5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′）、阴性对照组（转染随机序列）和正常对照组（不予转染等任何处理）。细胞按4.5×105个/孔接种于6孔板，基于RNA干扰(RNAi)技术、使用脂质体2000试剂进行细胞转染。采用细胞计数法检测转染后各组细胞的增殖情况。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞的miRNA-21转录水平。采用Western印迹技术检测转染后各组PDCD4蛋白表达情况。检测18对哈萨克族食管癌及其对应的癌旁正常食管组织中miRNA-21转录和PDCD4蛋白表达情况。结果 转染48 h后，与正常对照组比较，miRNA-21Mimics组Eca109细胞数增加36％(P=0.002)，miRNA-21抑制剂组细胞数减少28％(P=0.002)，阴性对照组细胞数变化不明显(P=0.515)。转染48 h后，miRNA-21抑制剂组、miRNA-21 Mimics 组、阴性对照组、正常对照组miRNA-21的相对表达量分别为0.37±0.10、9.17±1.08、0.74±0.23和1.04±0.34,PDCD4蛋白相对表达量分别为1.47±0.11、0.61±0.09、0.89±0.12、0.79±0.02。与正常对照组比较，miRNA-21抑制剂组miRNA-21相对表达量下降(P=0.031)、PDCD4蛋白相对表达量上调（P=0.001），miRNA-21 Mimics组miRNA-21相对表达量上升(P=0.001)、PDCD4相对表达量下调(P=0.030)，阴性对照组则差异无统计学意义（P值分别=0.272和0.541）。18对哈萨克族食管癌组织中16对的miRNA-21相对表达量(0.11±0.09)高于其对应的癌旁正常食管组织(0.03±0.03，P=0.001)，PDCD4蛋白相对表达量（0.92±0.39）低于其对应的癌旁正常食管组织（1.57±0.80，P=0.004），且癌组织中miRNA-21相对表达水平越高，PDCD4蛋白相对表达水平越低（r=-0.538，P=0.046）。结论miRNA-21可能通过抑制PDCD4蛋白表达而促进食管鳞癌细胞Eca109增殖，并且参与哈萨克族食管癌的发生。