猪SIRT1基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

• 作 者: 江学斌 马苗鹏 肖淑君 司徒嘉欣 杨军 施巨清 蔡海明 张玲
• 机 构: 广州大学生物工程研究所,华南农业大学生命科学学院/广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室
• 出 处: 华中农业大学学报
• 发表日期: 2014年5期
• 关键词: 猪 SIRT1 PCR 多克隆抗体 porcine SIRT1 PCR polyclonal antibody
• 基金项目: 广东省农业攻关项目(2012B020305007),广东省教育部产学研结合项目(2011B090400471)

根据GenBank中猪SIRT1mRNA序列设计引物,使用杜大长商品猪大脑RNA经RT-PCR扩增得到猪SIRT1基因全长表达序列,通过Ω-PCR将SIRT1蛋白末端抗原表位序列插入载体pET-28a(+),在大肠杆菌中表达并纯化得到45ku大小的蛋白,以其免疫新西兰大白兔并制备出抗体滴度达212的多克隆抗体。结果表明,成功制备出可以特异性识别猪SIRT1蛋白的抗体。