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目的 构建带有绿色荧光蛋白的Survivin基因真核表达载体pIRES2-EGFP/Survivin,并转染K562细胞.方法 以pDNR/Survivin质粒为模板,PCR扩增Survivin基因,T-A克隆,亚克隆至pIRES2-EGFP上,并对重组表达载体进行酶切、测序鉴定.采用Superfect转染试剂转染K562细胞.提取细胞RNA,RT-PCR检测Survivin基因mRNA表达.结果 经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP/Survivin载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的K562细胞有绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR证实转染细胞中存在Survivin基因mRNA的表达.结论 pIRES2-EGFP/Survivin表达载体构建成功,并在K562细胞内成功表达。