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目前，我国养殖业普遍重视畜禽“体内用药”，畜禽患病后抗生素等药物大量使用，导致出现药物残留、畜禽免疫力和生产性能下降、畜禽产品质量差、养殖成本加大、养殖效益差等系列问题。为保障养殖效益和倡导绿色无抗养殖模式，沈阳中亚兽药业有限公司从“生物安全理念”和“体外用药理念”角度出发，推出霸力360°系列消毒剂产品。“生物安全理念”是指预防临床或亚临床疾病发生的畜禽生产安全体系，重点强调环境因素在保证动物健康中所起的决定性作用，也就是保证畜禽生长处在最佳状态的生态环境中，保证其发挥最佳的生产性能，是实现养殖效益最大化的必要条件。“体外用药理念”即消毒，是指病原体处于养殖环境中，尚未进入畜禽体内，在此阶段利用敏感的消毒剂杀灭病原，突出在畜禽体外（环境）中杀灭病原体，是实现养殖效益最大化的必要途径。
为确保霸力360°系列消毒剂产品的杀毒和临床应用效果，沈阳中亚兽药业有限公司科研中心选用了大肠杆菌（8099）进行体外杀菌试验。
1 试验用菌
消毒剂指标菌分别为大肠杆菌（8099）。
2 霸力360°系列消毒剂产品（见表1）
3 中和剂的配制
3.1 中和剂Ⅰ
用于中和二氯异氰尿酸钠粉、速洁、安晶、佳晶、口蹄灭、中亚喷达康等消毒剂。无水磷酸氢二钠2.83克、磷酸二氢钾1.36克、胰蛋白胨10克、牛肉粉3克、葡萄糖2克、硫代硫酸钠5克、卵磷脂3克、甘氨酸3克、吐温-80 30毫升。将各成分加入到1升蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20分钟，冰箱保存备用。
3.2 中和剂Ⅱ
用于中和复合酚。卵磷脂30克、吐温80 30毫升，将各成分加入到1升蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20分钟，冰箱保存备用。
4 细菌悬液的制备
取大肠杆菌菌株加入生理盐水混匀后，取少量菌种接种于5毫升LB培养液中，37℃水浴18～24 小时，为第1代培养物；取第1代培养物接种于营养琼脂中，37℃培养18～24小时，为第2代培养物。在营养琼脂平板转接4次后，作为试验用；检测试验用菌悬液浓度为大肠杆菌（1×108cfu/mL）。
5 消毒效果验证
5.1 消毒剂稀释
见表1。
5.2 体外杀菌
将培养后的菌液原液稀释107倍后，取1毫升接种于琼脂平板，做倒置培养，24小时后记录平板菌落数，再乘以稀释倍数即得菌液原液浓度（约1×108 cfu/mL）。
每个试管中加入4.5毫升中和剂；另取试管，每管加入0.5毫升菌液，再加入0.5毫升液体培养基，20℃水浴5分钟，加入4毫升稀释好的消毒剂（对照组为PBS），作用15分钟后吸取0.5毫升加入装有4.5毫升中和剂的试管中，混合作用10分钟。取0.5毫升接种于琼脂平板，做倒置培养，24小时后记录平板菌落数。
6 杀菌率的计算方法
杀菌率= [1-（平板菌落数÷105）] × 100%
注：①菌液原浓度为108cfu/mL，经消毒剂、中和剂和涂平板三步骤时，分别各被稀释10倍，涂于每个琼脂平板的细菌数量约105个。②杀菌率>99%，视为合格；杀菌率99%视为不合格。
7 结果
7.1 卫保
7.2 速洁
7.3 复合酚
7.4 二氯异氰尿酸钠粉
7.5 安晶
7.6 中亚喷达康
7.7 佳晶
7.8 口蹄灭
8 讨论
在实验室条件下验证消毒剂的杀菌效果时，当细菌和消毒剂的混合液移入琼脂平板时，无法避免带有部分残余消毒剂，导致残留于琼脂平板上继续发挥杀菌作用，进而导致对消毒剂杀菌效果的过高评价。因此本研究中，在测定消毒剂的杀菌率时，必须除去残余消毒剂的影响，本研究所选用的中和剂能有效中和消毒剂，且不影响细菌生长。
9 结论
沈阳中亚兽药业有限公司科研中心对8种霸力360°系列消毒剂产品的24个稀释倍数进行了体外杀菌实验，杀菌率全部 >99%。
为确保霸力360°系列消毒剂产品的杀毒和临床应用效果，沈阳中亚兽药业有限公司科研中心选用了大肠杆菌（8099）进行体外杀菌试验。
1 试验用菌
消毒剂指标菌分别为大肠杆菌（8099）。
2 霸力360°系列消毒剂产品（见表1）
3 中和剂的配制
3.1 中和剂Ⅰ
用于中和二氯异氰尿酸钠粉、速洁、安晶、佳晶、口蹄灭、中亚喷达康等消毒剂。无水磷酸氢二钠2.83克、磷酸二氢钾1.36克、胰蛋白胨10克、牛肉粉3克、葡萄糖2克、硫代硫酸钠5克、卵磷脂3克、甘氨酸3克、吐温-80 30毫升。将各成分加入到1升蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20分钟，冰箱保存备用。
3.2 中和剂Ⅱ
用于中和复合酚。卵磷脂30克、吐温80 30毫升，将各成分加入到1升蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20分钟，冰箱保存备用。
4 细菌悬液的制备
取大肠杆菌菌株加入生理盐水混匀后，取少量菌种接种于5毫升LB培养液中，37℃水浴18～24 小时，为第1代培养物；取第1代培养物接种于营养琼脂中，37℃培养18～24小时，为第2代培养物。在营养琼脂平板转接4次后，作为试验用；检测试验用菌悬液浓度为大肠杆菌（1×108cfu/mL）。
5 消毒效果验证
5.1 消毒剂稀释
见表1。
5.2 体外杀菌
将培养后的菌液原液稀释107倍后，取1毫升接种于琼脂平板，做倒置培养，24小时后记录平板菌落数，再乘以稀释倍数即得菌液原液浓度（约1×108 cfu/mL）。
每个试管中加入4.5毫升中和剂；另取试管，每管加入0.5毫升菌液，再加入0.5毫升液体培养基，20℃水浴5分钟，加入4毫升稀释好的消毒剂（对照组为PBS），作用15分钟后吸取0.5毫升加入装有4.5毫升中和剂的试管中，混合作用10分钟。取0.5毫升接种于琼脂平板，做倒置培养，24小时后记录平板菌落数。
6 杀菌率的计算方法
杀菌率= [1-（平板菌落数÷105）] × 100%
注：①菌液原浓度为108cfu/mL，经消毒剂、中和剂和涂平板三步骤时，分别各被稀释10倍，涂于每个琼脂平板的细菌数量约105个。②杀菌率>99%，视为合格；杀菌率99%视为不合格。
7 结果
7.1 卫保
7.2 速洁
7.3 复合酚
7.4 二氯异氰尿酸钠粉
7.5 安晶
7.6 中亚喷达康
7.7 佳晶
7.8 口蹄灭
8 讨论
在实验室条件下验证消毒剂的杀菌效果时，当细菌和消毒剂的混合液移入琼脂平板时，无法避免带有部分残余消毒剂，导致残留于琼脂平板上继续发挥杀菌作用，进而导致对消毒剂杀菌效果的过高评价。因此本研究中，在测定消毒剂的杀菌率时，必须除去残余消毒剂的影响，本研究所选用的中和剂能有效中和消毒剂，且不影响细菌生长。
9 结论
沈阳中亚兽药业有限公司科研中心对8种霸力360°系列消毒剂产品的24个稀释倍数进行了体外杀菌实验，杀菌率全部 >99%。