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【摘要】 目的：评估一种国内自主建立利用唾液酸梅检测细菌性阴道病方法的价值。方法：选取我院门诊2011年3月至2013年3月就诊的共计患者266例，其中以外阴瘙痒、有异味、白带增多、伴有轻度外阴瘙痒等症状，使用无菌长棉拭子采集患者阴道壁下1／3处分泌物3份(尽量多取且均匀一致)，患者在取样前72 h内无性生活，且未使用阴道乳剂或灌注疗法。结果：实验过程中，由于酶量与底物浓度核定，而且底物过量，因此酶的催化活性与产物的量呈现正相关的趋势，如图1所示，两种底物与标准酶反应的最适pH值在6.0-6.5之间。结论：依据美国食品与药品监督管理局认证的Gryphus诊断试剂公司产品-BV BLUE试剂盒为参照，研制出一种可以呈现同BV BLUE试剂盒相同检测效果的低成本新型试剂，为临床医学提供更多的可能。
【关键词】 唾液酸梅细菌性阴道病检测
【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】1671-5160(2014)02-0248-01 细菌性阴道病主要是由阴道加特纳菌引起的一种阴道炎，可通过性关系传播。细菌性阴道病是加特纳菌、厌氧菌等增多，而乳酸杆菌减少，阴道内生态平衡系统改变而引起的疾病。其中，健康妇女阴道中也有加特纳菌寄生。以下将对此病做相关检测试验。
1材料和方法
1.1材料
我院妇科门诊2011年3月至2013年3月就诊的共计患者266例，其中以外阴瘙痒、有异味、白带增多、伴有轻度外阴瘙痒等症状，年龄20至43岁，平均年龄29岁，均为已婚妇女。使用无菌长棉拭子采集患者阴道壁下1／3处分泌物3份(尽量多取且均匀一致)，患者在取样前72 h内无性生活，且未使用阴道乳剂或灌注疗法。
1.2主要试剂与仪器
主要试剂包含唾液酸酶标准品(美New England Biolabs公司)无菌分装，BV BLUE试剂盒(含底物IBX一4041，美国Gryphus诊断试剂公司)以及显色剂NaOH、国产唾液酸酶一步法检测试剂盒(北京A公司)。主要仪器为DU-530型分光光度计(美国Beckman公司)，BX-41型倒置显微镜(日本Olympus公司)，pHS-25B型数字酸度计(上海大普仪器有限公司)。
1.3 方法
依据南京爱楷能生物科技有限公司提供的唾液酸酶快速检测BV试剂盒操作说明书的使用说明进行操作。对采集的患者阴道分泌物用专用稀释液进行0.5ml稀释，在将分泌物重复洗下之后，使用专用的吸管把稀释出来的阴道分泌物滴一滴到唾液酸梅反应孔中，尔后在反应孔中滴一滴酸梅显色液，把反应板放置于恒温孵育槽上，等待15后分钟后再观察结果。
2结果
2.1 两种底物与标准酶反应的最适pH值
实验过程中，由于酶量与底物浓度核定，而且底物过量，因此酶的催化活性与产物的量呈现正相关的趋势，如图1所示，可以把产物吸光度较高者对应的pH值作为酶的最适pH值。两种底物的吸光度在pH值由5.5到6.0时，上升比较明显，但随着pH值继续增加，吸光度呈现的变化开始趋于平稳，且MSTF在pH值达到6.5时出现了拐点，开始有所下降，由此得出唾液酸梅与底物缓冲液反应的最佳pH值为6.0-6.2。由于临床BV患者的实际阴道pH值大部分在5.0-6.5，为了减少偏酸性标本对反应液的影响，底物缓冲液的pH值在临床使用过程中应在6.0-6.5之间，如图1所示，pH值在6.0时，产物为蓝山或深绿色，为阳性。
2.2目的底物的标准酶LDL
在实验过程中，逐渐减少酶的用量并缩小用量之间的差距，以此来确定酶的浓度梯度。同时，根据波长扫描中产物峰是否产生、肉眼可以分辨出的颜色变化的程度、对应的产物峰吸光程度的高低来判断LDL，显然，反应后溶液的颜色会随着产物量的增加由黄至蓝逐渐变化。可以得出，在BV BLUE底物用量为目的底物的2倍时，目的底物MsTT在pH值6．0条件下所需标准酶的LDL为0．75 U，BV BLUE底物所需酶的LDL为1．25 u。根据以上结果，以BV BLUE底物所需酶的LDL为标准，调节目的底物用量使二者一致，即阴阳性标准相同，发现此时目的底物的用量仅为BV BLUE底物的1／2．78，即0．09 mg。
2.3 最佳反应温度
一般情况下，唾液酸酶的反应特性为，调整后的底物量如若在室温或寒冷状态下与含量不同的酶进行反应，吸光度为波长590 aiD。因此，MSTI在酶为37℃时催化活性最好，如在寒冷状态下，比如4℃，或产生假阴性而无法使用，4℃温度下的试剂必须确保在恢复到恒温状态后再进行相关检测。
3 讨论
细菌性阴道病（BV）是由于阴道菌群失调，乳酸杆菌减少而导致其他病原如加德纳菌、弯曲弧菌、各种压氧菌等的大量繁殖，实际上是一种以加德纳菌为主的混合感染。自1954年报道以来，因对其病原认识的不清而曾称为嗜血杆菌阴道炎、棒状杆菌阴道炎和非特异性阴道炎，直到1984年在瑞典的专题国际会议上才正式命名为BV。而唾液酸梅则是BV患者在阴道分泌物中分泌出的特异性酶之一，且它的活性在临床实验中显示与BV患者的感染水平呈现正相关。因此，本文依据美国食品与药品监督管理局认证的Gryphus诊断试剂公司产品—BV BLUE试剂盒为参照，研制出一种可以呈现同BV BLUE试剂盒相同检测效果的低成本新型试剂，为临床医学提供更多的可能。
临床结果显示出，临床试验中138例疑似患者BV BLUE阳性检出率为26％，研发试剂敏感性为92％，研发试剂为25％，符合率为96％，特异性为98％，阴性预测值为97％，阳性预测值为94％。经Kappa检验和Mc．Nemar检验分析，与BV BLUE相比，研发试剂与其差异可以忽略不计，两种试剂存在较强的吻合度，其中有5例结果不甚吻合，经Amsel标准判断认为：Amsel结果阳性1例，阴性1例，研发试剂阳性、BV BLUE阴性2例标本，Amsel阳性2例，阴性1例，研发试剂阴性、BV BLUE阳性3例标本。
参考文献
[1]朱园园,沈佐君,万士林.一种检测细菌性阴道病方法的建立及临床评价[J].检验医学,2009,05:350-354.
[2]张晓洁，邱胜丰，董宁，黎青，王敏.唾液酸苷酶法检测在细菌性阴道病诊断中的意义[J].江苏医药，2011,20:2399-2401.
[3]楼洪萍,赵晓飞,李伟. 唾液酸苷酶法在细菌性阴道病诊断中的临床应用评价[J].中国卫生检验杂志,2011,06:1476-1478.
【关键词】 唾液酸梅细菌性阴道病检测
【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】1671-5160(2014)02-0248-01 细菌性阴道病主要是由阴道加特纳菌引起的一种阴道炎，可通过性关系传播。细菌性阴道病是加特纳菌、厌氧菌等增多，而乳酸杆菌减少，阴道内生态平衡系统改变而引起的疾病。其中，健康妇女阴道中也有加特纳菌寄生。以下将对此病做相关检测试验。
1材料和方法
1.1材料
我院妇科门诊2011年3月至2013年3月就诊的共计患者266例，其中以外阴瘙痒、有异味、白带增多、伴有轻度外阴瘙痒等症状，年龄20至43岁，平均年龄29岁，均为已婚妇女。使用无菌长棉拭子采集患者阴道壁下1／3处分泌物3份(尽量多取且均匀一致)，患者在取样前72 h内无性生活，且未使用阴道乳剂或灌注疗法。
1.2主要试剂与仪器
主要试剂包含唾液酸酶标准品(美New England Biolabs公司)无菌分装，BV BLUE试剂盒(含底物IBX一4041，美国Gryphus诊断试剂公司)以及显色剂NaOH、国产唾液酸酶一步法检测试剂盒(北京A公司)。主要仪器为DU-530型分光光度计(美国Beckman公司)，BX-41型倒置显微镜(日本Olympus公司)，pHS-25B型数字酸度计(上海大普仪器有限公司)。
1.3 方法
依据南京爱楷能生物科技有限公司提供的唾液酸酶快速检测BV试剂盒操作说明书的使用说明进行操作。对采集的患者阴道分泌物用专用稀释液进行0.5ml稀释，在将分泌物重复洗下之后，使用专用的吸管把稀释出来的阴道分泌物滴一滴到唾液酸梅反应孔中，尔后在反应孔中滴一滴酸梅显色液，把反应板放置于恒温孵育槽上，等待15后分钟后再观察结果。
2结果
2.1 两种底物与标准酶反应的最适pH值
实验过程中，由于酶量与底物浓度核定，而且底物过量，因此酶的催化活性与产物的量呈现正相关的趋势，如图1所示，可以把产物吸光度较高者对应的pH值作为酶的最适pH值。两种底物的吸光度在pH值由5.5到6.0时，上升比较明显，但随着pH值继续增加，吸光度呈现的变化开始趋于平稳，且MSTF在pH值达到6.5时出现了拐点，开始有所下降，由此得出唾液酸梅与底物缓冲液反应的最佳pH值为6.0-6.2。由于临床BV患者的实际阴道pH值大部分在5.0-6.5，为了减少偏酸性标本对反应液的影响，底物缓冲液的pH值在临床使用过程中应在6.0-6.5之间，如图1所示，pH值在6.0时，产物为蓝山或深绿色，为阳性。
2.2目的底物的标准酶LDL
在实验过程中，逐渐减少酶的用量并缩小用量之间的差距，以此来确定酶的浓度梯度。同时，根据波长扫描中产物峰是否产生、肉眼可以分辨出的颜色变化的程度、对应的产物峰吸光程度的高低来判断LDL，显然，反应后溶液的颜色会随着产物量的增加由黄至蓝逐渐变化。可以得出，在BV BLUE底物用量为目的底物的2倍时，目的底物MsTT在pH值6．0条件下所需标准酶的LDL为0．75 U，BV BLUE底物所需酶的LDL为1．25 u。根据以上结果，以BV BLUE底物所需酶的LDL为标准，调节目的底物用量使二者一致，即阴阳性标准相同，发现此时目的底物的用量仅为BV BLUE底物的1／2．78，即0．09 mg。
2.3 最佳反应温度
一般情况下，唾液酸酶的反应特性为，调整后的底物量如若在室温或寒冷状态下与含量不同的酶进行反应，吸光度为波长590 aiD。因此，MSTI在酶为37℃时催化活性最好，如在寒冷状态下，比如4℃，或产生假阴性而无法使用，4℃温度下的试剂必须确保在恢复到恒温状态后再进行相关检测。
3 讨论
细菌性阴道病（BV）是由于阴道菌群失调，乳酸杆菌减少而导致其他病原如加德纳菌、弯曲弧菌、各种压氧菌等的大量繁殖，实际上是一种以加德纳菌为主的混合感染。自1954年报道以来，因对其病原认识的不清而曾称为嗜血杆菌阴道炎、棒状杆菌阴道炎和非特异性阴道炎，直到1984年在瑞典的专题国际会议上才正式命名为BV。而唾液酸梅则是BV患者在阴道分泌物中分泌出的特异性酶之一，且它的活性在临床实验中显示与BV患者的感染水平呈现正相关。因此，本文依据美国食品与药品监督管理局认证的Gryphus诊断试剂公司产品—BV BLUE试剂盒为参照，研制出一种可以呈现同BV BLUE试剂盒相同检测效果的低成本新型试剂，为临床医学提供更多的可能。
临床结果显示出，临床试验中138例疑似患者BV BLUE阳性检出率为26％，研发试剂敏感性为92％，研发试剂为25％，符合率为96％，特异性为98％，阴性预测值为97％，阳性预测值为94％。经Kappa检验和Mc．Nemar检验分析，与BV BLUE相比，研发试剂与其差异可以忽略不计，两种试剂存在较强的吻合度，其中有5例结果不甚吻合，经Amsel标准判断认为：Amsel结果阳性1例，阴性1例，研发试剂阳性、BV BLUE阴性2例标本，Amsel阳性2例，阴性1例，研发试剂阴性、BV BLUE阳性3例标本。
参考文献
[1]朱园园,沈佐君,万士林.一种检测细菌性阴道病方法的建立及临床评价[J].检验医学,2009,05:350-354.
[2]张晓洁，邱胜丰，董宁，黎青，王敏.唾液酸苷酶法检测在细菌性阴道病诊断中的意义[J].江苏医药，2011,20:2399-2401.
[3]楼洪萍,赵晓飞,李伟. 唾液酸苷酶法在细菌性阴道病诊断中的临床应用评价[J].中国卫生检验杂志,2011,06:1476-1478.