【摘 要】
：
目的 克隆RNF185全长基因,构建真核表达载体,检测其蛋白表达和亚细胞定位,并探讨RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.方法 TRIzol法提取人胚肾HEK293T细胞的总RNA,经R
【机 构】
：
解放军总医院第一附属医院全军骨科研究所
论文部分内容阅读
目的 克隆RNF185全长基因,构建真核表达载体,检测其蛋白表达和亚细胞定位,并探讨RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.方法 TRIzol法提取人胚肾HEK293T细胞的总RNA,经RT-PCR反应扩增出RNF185基因,并通过酶切连接将其构建到真核表达载体pCMV-Myc和pEGFP-N1上,阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序.测序正确后抽提质粒作为模板扩增N端截短体,构建其真核表达载体.转染MC3T3-E1检测其蛋白表达及亚细胞定位情况.采用碱性磷酸酶染色法分析RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.结果 ①完成了RNF185的分子克隆,构建的真核表达载体pCMV-Myc-RNF185测序正确,所获得的序列与GenBank中收录的序列完全一致,N端截短体测序正确;②成功转染至MC3T3-E1细胞,蛋白相对分子质量大小与预期一致,全长形式定位于质膜;③RNF185及其N端截短体过表达均可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化.结论 RNF185过表达可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化.
其他文献
目的 探讨中国安徽蚌埠地区汉族人群Graves病患者促甲状腺激素受体(TSHR)基因内含子l上单核苷酸多态性位点(SNP) rs179247、rs12101261、rs2284722、rs4903964、rs2300525、r
H175S是以1892S为母本,广占63S为父本杂交,经过7 a 13代系谱选择育成的育性稳定、败育彻底、育性转换临界温度较低(23.5℃)、株叶形态好、穗大粒多、抗性较好、米质优、配合
视频监控中,拥挤人群的相互遮挡给人体分割和跟踪带来很大困难.为了解决该问题,提出人体模型和人体边缘曲线相结合的人体分割方法.针对分割可能造成人体特征值存在较大的缺损、畸变问题,采用具有较高鲁棒性的BP(Back Propaga-tion)神经网络作为跟踪模型.为了提高BP网络的自主学习能力,采用分层Dirichlet过程来判断是否有新类别的人体特征数据产生,进而为BP网络的学习提供决策.通过仿真实
以叶数较少、叶面积较小的烤烟品种丸叶为母本(P1),以叶数较多、叶面积较大的烤烟品种Coker319为父本,构建了6个世代分离群体,利用植物数量性状主基因+多基因混合遗传模型的
RNAi (RNA interference)是一种由dsRNA参与、对靶基因表达进行干扰或沉默的现象.由此发展起来的RNAi基因沉默技术已成为当今植物基因功能研究和遗传改良的一个重要手段.该技
目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术.方法:收集小鼠囊胚、固定；制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针；对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)的亚通路信号蛋白-细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)、P38和
目的构建四环素诱导基因表达的3代慢病毒系统,为慢病毒介导的基因治疗提供实验依据。方法将四环素调控的转录激活因子(rtTA和M2rtTA)分别克隆入带有新霉素(neo)筛选标记的慢